[发明专利]一种华盖木高效离体培养植株再生方法

说明书

本发明属于植物的组织培养技术领域，提供了一种华盖木组培高效扩繁与种群扩大的方法。本发明以华盖木成年大树为母本，通过对母树的抑菌处理后，采集刚萌发带芽苞茎段为外植体，外植体经表面及深层次消毒后，通过诱导、增殖与生根培养的基本培养基、植物生长调节剂及培养环境的优化筛选，建立华盖木高效组培快繁技术，繁殖周期为25 d，极大地提高了华盖木的繁殖生长速率，有效解决了国家一级保护、极度濒危物种华盖木野外种群数量扩大、实现保护性开发利用的苗木繁殖技术问题，意义重大。

技术领域

本发明属于植物的组织培养技术领域，提供涉及一种极度濒危木兰科树种华盖木组培高效再生方法，并进而实现扩繁与种群扩大。

背景技术

华盖木(Manglietiastrumsinicum Law)隶属木兰科(Magnoliaceae)华盖木属(Manglietiastrum)，常绿大乔木，成年树高可达46m，胸径1.2m；为我国特有的单种属植物。然而由于过度开发及生态环境的恶化，目前，自然分布区仅存7棵古树，没有树苗或中年树，是名副其实的“植物界大熊猫”。华盖木于1999年被列为国家Ⅰ级重点保护野生植物，世界自然保护联盟(IUCN)保护的极度濒危树种。华盖木是木兰科亚科顶生花木兰族中的原始类群，对木兰科分类系统和古植物学区系等研究有重要学术价值。

华盖木心材淡绿色，光泽似丝绢，纹理直，结构细致，耐腐、抗虫，当地群众称它为“缎子绿豆树”，在木材中极罕见，是珍贵的用材树种；华盖木树形优美、树干挺拔通直，叶片光亮，花艳丽而芳香，是珍贵的绿化观赏树种；华盖木精油提取率高达0.56％，从中提取的纯天然植物香精芳樟醇，价格昂贵，被称作植物中的“软黄金”。华盖木目前繁殖方式主要是种子繁殖，种子质量差，自然萌发率低，严重制约了华盖木的开发利用。

目前刘均利等对华盖木初代培养中的褐化问题进行了研究，但并未解决褐化问题；马均等对华盖木腋芽诱导的结果并不理想，诱导率仅为53.33％；罗桂芬等以华盖木嫩枝为外植体进行组培快繁，得到的诱导率仅为58％，且繁殖周期长，达60d，移栽成活率仅为86％。均未实现华盖木的高效离体培养植株再生。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种极度濒危木兰科树种华盖木组培高效扩繁与种群扩大的方法。该方法具有外植体进瓶污染率为0％、褐化率极低，腋芽诱导快、诱导率高达100％，增殖系数大、达4.46，芽伸长，有效芽数高达6.70，繁殖周期短、为25d，生根率高、达88.89％，生根苗根系健壮、平均根数为5.51条/株，移栽成活率高、可达92.2％以上等特点。

本发明提供了一种极度濒危木兰科树种华盖木组培高效再生方法，包括以下步骤：

(1)外植体准备与处理：为保证树种原有特性选择20～30年生实生大树为母本，采集刚萌发带芽苞茎段为外植体，此种茎段不仅相对幼嫩易实现诱导，且抗性较强，经消毒处理不易褐化，取材充足有利于规模化应用，形成规模化育苗。

(2)外植体表面消毒；

(3)芽诱导：将消毒好的外植体接入配制好的诱导分化培养基中进行培养；所述诱导分化培养基是在MS基本培养基中添加6-BA0.1～2.0mg/L、IBA0～0.2mg/L、NAA0～0.2mg/L，蔗糖30g/L和琼脂6.0g/L制备而成，pH值为5.8；在温度为25±2℃，光照强度为1500～2000luxlux，光照时间为12h/d的培养室中进行培养；

(4)增殖培养：将诱导培养20d，长1～2cm的腋芽切下转接到增殖培养基中进行增殖培养；所述增殖培养基在改良MS基本培养基中添加6-BA0.4～0.8mg/L、KT 0.3～0.8mg/L、IBA0.04～0.08mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6.0g/L，反复继代增殖培养扩大繁殖，pH值为5.8；在温度为25±2℃，光照强度为1500～2000luxlux，光照时间为12h/d的培养室中进行培养；