[发明专利]花生U6启动子及其在花生CRISPR-Cas9基因编辑中的应用在审
| 申请号： | 202310158649.5 | 申请日： | 2023-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN116334083A | 公开（公告）日： | 2023-06-27 |
| 发明（设计）人： | 赵龙刚;乔利仙;李晶晶;黄建斌;刘文平;唐艳艳;王晶珊 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学;东营青农大盐碱地高效农业技术产业研究院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/82;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/54 |
| 代理公司： | 山东三邦知识产权代理事务所(普通合伙) 37308 | 代理人： | 牛继梅 |
| 地址： | 266109 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 花生 u6 启动子 及其 crispr cas9 基因 编辑 中的 应用 | ||
1.一种花生U6启动子，其特征在于，所述花生U6启动子为AhA3U6或AhB9U6，所述启动子AhA3U6的核酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述启动子AhB9U6的核酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.核酸序列如SEQ ID NO:1所示的启动子AhA3U6或核酸序列如SEQ ID NO:2所示的启动子AhB9U6在提高花生CRISPR-Cas9基因编辑效率中的应用。
3.一种花生CRISPR-Cas9基因编辑载体，其特征在于，所述花生CRISPR-Cas9基因编辑载体中的启动子为AhA3U6或AhB9U6，所述启动子AhA3U6的核酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述启动子AhB9U6的核酸序列如SEQ ID NO:2所示。
4.根据权利要求3所述花生CRISPR-Cas9基因编辑载体，其特征在于，是将pBGK041-GmU6载体中的GmU6启动子替换为AhA3U6或AhB9U6获得。
5.权利要求3或4所述花生CRISPR-Cas9基因编辑载体在花生基因编辑中的应用。
6.一种花生CRISPR-Cas9基因编辑的方法，其特征在于，步骤如下：
将目标基因靶位点的核酸序列构建到权利要求3或4所述花生CRISPR-Cas9基因编辑载体中，获得CRISPR-Cas9基因编辑重组质粒；将CRISPR-Cas9基因编辑重组质粒转化到农杆菌中，制备侵染液，侵染花生，筛选阳性转化株，实现花生目标基因的CRISPR-Cas9基因编辑。
7.根据权利要求6所述花生CRISPR-Cas9基因编辑的方法，其特征在于，所述农杆菌侵染花生的方法为发根农杆菌转化法或花粉管通道转化法。
8.根据权利要求7所述花生CRISPR-Cas9基因编辑的方法，其特征在于，所述发根农杆菌转化法中采用的农杆菌为发根农杆菌，所述花粉管通道转化法中采用的农杆菌为根癌农杆菌。
9.一种花生PEPC1基因的编辑方法，其特征在于，设计花生PEPC1基因的靶位点序列，将靶位点的核酸序列构建到权利要求3或4所述花生CRISPR-Cas9基因编辑载体中，获得CRISPR-Cas9基因编辑重组质粒；将CRISPR-Cas9基因编辑重组质粒转化到农杆菌中，制备侵染液，侵染花生，筛选阳性转化株，实现花生目标基因的CRISPR-Cas9基因编辑。
10.根据权利要求9所述花生PEPC1基因的编辑方法，其特征在于，所述花生PEPC1基因的靶位点序列是根据Aradu.A52DW和Araip.RUX3H基因序列设计的，两者共有的一段碱基序列；其中，所述Aradu.A52DW基因的核酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述Araip.RUX3H基因的核酸序列如SEQ ID NO:8所示。
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