[发明专利]一种代谢工程改造酿酒酵母从头合成δ-生育三烯醇的方法在审
| 申请号： | 202310158802.4 | 申请日： | 2023-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN116411013A | 公开（公告）日： | 2023-07-11 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;刘延峰;韩璐瑶 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/90;C12N15/61;C12N15/53;C12N15/54;C12N9/90;C12N9/10;C12N1/19;C12P7/04;C12R1/865 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 代谢 工程 改造 酿酒 酵母 从头 合成 生育 三烯醇 方法 | ||
1.一种代谢工程改造酿酒酵母从头合成δ-生育三烯醇的方法，其特征在于，所述方法是在酿酒酵母基因组上整合对羟基苯丙酮酸双加氧酶HPPD、尿黑酸牻牛儿基牻牛儿基转移酶HGGT和截短后的生育酚环化酶tTC，并过表达GGPP合成酶CrtE和FPP合成酶突变体FPSF112A。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对截短后的生育酚环化酶tTC进行突变，将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的亲本序列的第331位点天冬酰胺突变为脯氨酸。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括过表达采用蛋白支架SH3组装的HPPD和HGGT-tTCN331P复合体，其中，所述蛋白支架SH3的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，HGGT和tTCN331P之间采用短蛋白连接体(GGGGS)3融合表达。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括采用过表达内源转运蛋白PDR11，获得分泌生产δ-生育三烯酚的酿酒酵母。
6.一种从头合成δ-生育三烯醇的酿酒酵母，其特征在于，所述酿酒酵母是在酿酒酵母宿主的基因组上整合表达对羟基苯丙酮酸双加氧酶HPPD、尿黑酸牻牛儿基牻牛儿基转移酶HGGT和截短后的生育酚环化酶tTC，并过表达GGPP合成酶CrtE和FPP合成酶突变体FPSF112A。
7.根据权利要求6所述的酿酒酵母，其特征在于，对羟基苯丙酮酸双加氧酶HPPD的NCBI编号为NP_172144.3；尿黑酸牻牛儿基牻牛儿基转移酶HGGT的NCBI编号为BAA17774；截短后的生育酚环化酶tTC的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，或将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的亲本序列的第331位点天冬酰胺突变为脯氨酸；GGPP合成酶CrtE的NCBI编号为AAS49033.1；FPP合成酶突变体FPSF112A的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
8.根据权利要求6所述的酿酒酵母，其特征在于，所述酿酒酵母中，过表达了采用蛋白支架SH3组装的HPPD和HGGT-tTCN331P复合体；其中，所述蛋白支架SH3的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示，HGGT和tTCN331P之间采用短蛋白连接体(GGGGS)3融合表达。
9.根据权利要求6所述的酿酒酵母，其特征在于，所述酿酒酵母中，过表达了内源转运蛋白PDR11。
10.权利要求6～9任一项所述酿酒酵母在发酵生产δ-生育三烯醇中的应用。
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