[发明专利]一种用于测定FQs的混合磁性材料适配体制备及处理样品的方法

说明书

本发明公开一种用于测定FQs的混合磁性材料适配体制备及处理样品的方法，包括步骤一、氨基功能化Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;的合成，步骤二、混合磁性材料的合成，步骤三、亲和素修饰混合磁性材料的合成，步骤四、混合磁性材料适配体的组装合成，步骤五、利用制备的混合磁性材料适配体处理样品；本发明基于适配体合成得到具有良好热稳定性和耐化学性同时具有高度选择性和特异性识别能力的混合磁性材料适配体，并将其应用于FQs的测定萃取样品前处理，为兽药残留提供了一种重复性、稳定性和应用性好的检测剂和检测方法。

技术领域

本发明涉及兽药检测技术领域，尤其涉及一种用于测定FQs的混合磁性材料适配体制备及处理样品的方法。

背景技术

氟喹诺酮类兽药(Fluoroquinolones，FQs)因具有广谱抗菌性质被大量用于预防和治疗动物疾病，但因大量不规范使用造成水源污染，最终导致FQs残留问题日益突显。

FQs药物残留通过食用动物性食品进入食用者体内，引起人体肠道菌群失衡或产生远期毒性作用，主要包括潜在致癌、致畸和致突变等危害；同时，环境中的FQs残留可能会导致耐药细菌产生，破坏水环境的生态系统，使人和动物更容易受到耐药细菌的影响，而目前使用核酸适配体技术在兽药残留的检测中应用广泛，但依然存在重复性、稳定性和应用性较差的问题，因此，本发明提出一种用于测定FQs的混合磁性材料适配体制备及处理样品的方法以解决现有技术中存在的问题。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提出一种用于测定FQs的混合磁性材料适配体制备及处理样品的方法，该用于测定FQs的混合磁性材料适配体制备及处理样品的方法基于适配体合成得到具有良好热稳定性和耐化学性同时具有高度选择性和特异性识别能力的混合磁性材料适配体，并将其应用于FQs的测定萃取样品前处理，为兽药残留提供了一种重复性、稳定性和应用性好的检测剂和检测方法。

为实现本发明的目的，本发明通过以下技术方案实现：一种用于测定FQs的混合磁性材料适配体制备及处理样品的方法，包括以下步骤：

步骤一、合成氨基功能化Fe₃O₄，向圆底烧瓶中加入30mL的乙二醇、2.0g的无水醋酸钠、1.0g的六水合三氯化铁和6.5g的1,6-乙二胺，并在50℃水浴加热条件下磁力搅拌得到酒红色均质胶体，随后移至反应釜中198℃高温下反应6h分离得到氨基功能化的Fe₃O₄备用；

步骤二、合成混合磁性材料，将0.553g、3.05mmoL的2-氨基对苯二甲酸溶解在40mL的N,N-二甲基甲酰胺中，将1.699g、7.74mmoL的乙酸锌,二水溶解在50mL的N,N-二甲基甲酰胺中，再将锌盐溶液滴入对2-氨苯二甲酸溶液中进行15min的搅拌制得米黄色沉淀物，随后在超声作用下立即加入0.80g氨基功能化的Fe₃O₄，超声分散均匀后转移至反应釜中120℃高温下反应24h冷却洗涤干燥得到棕黄色混合磁性材料备用；

步骤三、合成亲和素修饰混合磁性材料，将混合磁性材料分散在PBS溶液中，随后加入戊二醛水溶液反应并磁分离得到沉淀物，并将其洗涤后分散于20mL含有1000μg亲和素的PBS溶液中震荡孵育12h，再次使用PBS溶液洗涤得到亲和素修饰混合磁性材料并悬浮于PBS溶液中保存备用；

步骤四、合成混合磁性材料适配体，将亲和素修饰混合磁性材料分散于含有适配体的PBS溶液中震荡孵育，用PBS清洗3次后得到混合磁性材料适配体并将其分散于40mL的Tris-HCL中保存；

步骤五、混合磁性材料适配体处理样品，将牛奶样品和鱼肉样品进行预处理后的样品溶液与混合磁性材料适配体混合震荡孵育，然后进行洗脱处理并收集洗脱液过膜后利用高效液相色谱仪进行分析。