[发明专利]识别CV-A4 VP1蛋白N末端的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及识别CV‑A4的单克隆抗体及其应用。该单克隆抗体具有SEQ ID NO.9～11所示的重链互补决定区CDR1～CDR3，以及SEQ ID NO.12～14所示的轻链互补决定区CDR1～CDR3；或具有SEQ ID NO.19～21所示的重链互补决定区CDR1～CDR3，以及SEQ IDNO.22～24所示的轻链互补决定区CDR1～CDR3；或具有SEQ ID NO.29～31所示的重链互补决定区CDR1～CDR3，以及SEQ ID NO.32～34所示的轻链互补决定区CDR1～CDR3，其能够特异性识别CV‑A4的结构蛋白VP1N末端。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及能够识别柯萨奇病毒A组4型(CV-A4)VP1蛋白N末端的单克隆抗体及其应用。

背景技术

肠道病毒蛋白衣壳由VP1、VP2、VP3和VP4四种结构蛋白组成，呈20面体立方对称，VP1、VP2、VP3组成外壳，VP4位于颗粒内表面，VP1蛋白位于病毒颗粒最外层，具有较好免疫原性并且含有最多的中和表位。VP1主要涉及免疫应答和宿主-细胞受体结合，参与宿主的免疫过程，VP1与细胞受体结合后引起构象改变，识别病毒RNA进入细胞内，另外，VP1的氨基酸与核苷酸序列和中和抗原分型密切相关，可用于病毒鉴定和进化分析；VP1自剪切机制的研究针对病毒整个生命周期的研究和探索构象变化的过程十分重要。目前针对肠道病毒VP1蛋白建立的诊断和疫苗开发方面具有重要的发展潜力，特异性识别VP1蛋白不同区域的鼠单克隆抗体或兔单克隆抗体(中和及非中和类型)的发现，会对VP1蛋白的基础研究，蛋白功能验证和试剂盒的开发起到了重要的推进作用。

柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus A4,CV-A4)属小RNA病毒科，肠道病毒属，主要引起儿童疱疹性咽郏炎和手足口病。近年来，CV-A4在我国福建、山东、四川、云南和江苏以及其他国家，如泰国、澳大利亚和意大利多次爆发，虽然大多数CV-A4感染通常是无明显的临川症状，但仍具有高度传染性，在临床病例中出现多种疾病，从轻度症状(如红斑，斑丘疹)到严重的症状(如无菌性脑膜炎、心肌炎和急性弛缓性麻痹)，并且随着CV-A4在全球流行频率增加，新型的CV-A4病毒也开始出现。

因此，开发特异性识别CV-A4的单克隆抗体对疫苗研发的质控、临床样本的检测和实验室病毒鉴别，CV-A4基础功能的研究具有重要意义。

发明内容

基于此，本发明的目的之一在于提供能够识别CV-A4 VP1蛋白N末端的单克隆抗体，所述单克隆抗体为2E1A单克隆抗体或2D1B单克隆抗体或17C4C单克隆抗体，其中2E1A单克隆抗体具有SEQ ID NO.9～11所示的重链互补决定区CDR1～CDR3，以及SEQ ID NO.12～14所示的轻链互补决定区CDR1～CDR3；

2D1B单克隆抗体具有SEQ ID NO.19～21所示的重链互补决定区CDR1～CDR3，以及SEQ ID NO.22～24所示的轻链互补决定区CDR1～CDR3；

17C4C单克隆抗体具有SEQ ID NO.29～31所示的重链互补决定区CDR1～CDR3，以及SEQ ID NO.32～34所示的轻链互补决定区CDR1～CDR3。

该单克隆抗体与现有的CV-A4单克隆抗体不同，其能够特异性识别CV-A4的结构蛋白VP1 N末端15个氨基酸，可用于CV-A4病毒颗粒的形态构象转变中间体功能和N末端氨基酸在穿入细胞膜、释放病毒RNA至胞内的基础研究。

优选的，所述2E1A单克隆抗体具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的重链；和/或，2E1A所述单克隆抗体具有SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列的轻链。

优选的，所述2D1B单克隆抗体具有如SEQ ID NO.17所示的氨基酸序列的重链；和/或，2D1B所述单克隆抗体具有SEQ ID NO.18所示的氨基酸序列的轻链。