[发明专利]一种分子量低纯度高的海带多糖活性片段的制备方法

说明书

本发明公开了一种分子量低纯度高的海带多糖活性片段的制备方法，属于多糖降解技术领域。操作步骤如下：（1）将海带多糖均一组分溶于乙酸‑乙酸钠缓冲液中超声，舒展多糖的链结构，加入β‑甘露聚糖酶进行酶解，实施定点切割，获得低分子量海带多糖混合物；（2）经过葡聚糖凝胶分离纯化，得到均一的低分子量的海带多糖活性片段，海带多糖活性片段为粉末状，分子量为1371道尔顿，主要含有葡萄糖、甘露糖和半乳糖。本发明具有操作简单，无污染，反应稳定的优势，降解后的多糖具有明显的抑制巨噬细胞泡沫化活性。

技术领域

本发明属于多糖降解技术领域，具体涉及一种超声联合酶降解海带多糖的方法。

背景技术

海带（学名 Laminaria japonica）为海带属海带科植物，固着器呈假根状，柄部短粗，起连接作用，叶片宽大，呈长条状，通常以干制品的形式销售。海带中富含多糖、蛋白质、氨基酸、膳食纤维和矿物质等成分，并且产量高，资源丰富，烹饪简单，是一种理想的天然食品。

海带的主要活性成分是多糖，经研究，海带多糖具有包括抗肿瘤、抗病毒、抗动脉粥样硬化、降血糖、降血脂等在内的多种生物活性。课题组前期从海带中提取出一种均一海带多糖，经研究发现，这种均一海带多糖能够显著抑制巨噬细胞泡沫化。然而，其分子量高达1.96×10⁶道尔顿，过大的分子量导致多糖粘度高，水溶性差，吸收率低，这严重阻碍了海带多糖在食品、药品等领域的进一步研究与开发。近些年来，很多研究证明了多糖分子中存在一种或多种低分子量的片段作为“活性中心”，当多糖进入体内时，这些片段能够与细胞膜表面受体结合，进而发挥生物活性。因此，通过降解多糖并进一步分离纯化得到均一的低分子量活性片段，是当下多糖研究的热点。

传统的多糖降解包括物理降解，化学降解和生物降解。其中，物理降解又包括微波降解、超声降解和辐射降解，这些降解方式操作简单，适用性广，但是效率低下，难以破坏多糖分子中的糖苷键，通常作为其他降解方法的预处理。化学降解包括酸解、自由基降解，自由基降解同样效率低下，酸解效率高，但是反应剧烈，降解产物杂乱且易产生有害物质等。生物降解法主要为酶法降解，包括特异性酶和非特异性酶，酶法降解反应温和，通过选用不同的酶可以实现对多糖的定点切割，但是对于不同的多糖，需要选用不同的酶，并且需要多次实验对反应条件进行优化。

发明内容

为了实现操作简单、高效率制备分子量低纯度高的海带多糖纯化降解产物，本发明提供一种分子量低纯度高的海带多糖活性片段的制备方法。

一种分子量低纯度高的海带多糖活性片段的制备操作步骤如下：

（1）降解海带多糖

将海带多糖均一组分溶于乙酸-乙酸钠缓冲液中，经过超声，加入β-甘露聚糖酶进行酶解；酶解物煮沸灭活，离心除酶，透析，冻干，获得低分子量海带多糖混合物；

所述海带多糖均一组分为粉末状，分子量为1.96×10⁶道尔顿，按摩尔比1：1.85：2.92由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成；

（2）低分子海带多糖混合物的分离与纯化

将低分子量海带多糖混合物通过葡聚糖凝胶柱分离纯化，得到均一的低分子量的海带多糖活性片段；

所述海带多糖活性片段为粉末状，分子量为1371道尔顿。

进一步的技术方案如下：