[发明专利]一种牛源A型多杀性巴氏杆菌减毒株及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株，其特征在于，在牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2的基础上，缺失基因组中889，890，891，892，893和894基因。

2.根据权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株，其特征在于，889基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

890基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

891基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

892基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

893基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

894基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

3.权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

以牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2的基因组DNA为模板，分别以引物Pm889-894U-F/Pm889-894U-R扩增Pm889-894基因的上游同源臂，用引物Pm889-894D-F/Pm889-894D-R扩增Pm889-894基因的下游同源臂；

将所述Pm889-894基因的上游同源臂和扩增Pm889-894基因的下游同源臂克隆至pUC19oriKan^R质粒中，得到缺失基因重组质粒pUC19oriKanRΔ889-894；

将所述缺失基因重组质粒pUC19oriKanRΔ889-894转化入PmCQ2感受态细胞中，得到PmCQ2Δ889-894。

4.根据权利要求3所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株的构建方法，其特征在于，所述引物Pm889-894U-F/Pm889-894U-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:8所示。

5.根据权利要求3所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株的构建方法，其特征在于，所述引物Pm889-894D-F/Pm889-894D-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:9和SEQ IDNO:10所示。

6.根据权利要求3所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株的构建方法，其特征在于，所述克隆的方法为将pUC19oriKan^R质粒分别用HindⅢ和BamHⅠ限制性内切酶酶切，将Pm889-894基因的上游同源臂和扩增Pm889-894基因的下游同源臂连接至酶切后的pUC19oriKan^R质粒中，得到缺失基因重组质粒pUC19oriKanRΔ889-894。

7.根据权利要求3～6任意一项所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株的构建方法，其特征在于，所述转化的方法包括电转化；

所述电转化的电击电压为2500V，电阻500欧，所述电转化的时间为5ms。

8.权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株或权利要求3～8任意一项所述构建方法得到的牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株在制备广谱多杀性巴氏杆菌疫苗中的应用。

9.根据权利要求8所述应用，其特征在于，广谱多杀性巴氏杆菌疫苗包括A型多杀性巴氏杆菌疫苗、B型多杀性巴氏杆菌疫苗和F型多杀性巴氏杆菌疫苗。

10.一种广谱多杀性巴氏杆菌疫苗，其特征在于，包括佐剂和权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株或权利要求3～8任意一项所述构建方法得到的牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株。