[发明专利]一种牛源A型多杀性巴氏杆菌减毒株及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种牛源A型多杀性巴氏杆菌减毒株及其制备方法和应用，属于生物制品技术领域。本发明提供的牛源A型多杀性巴氏杆菌减毒株PmCQ2Δ889‑894是缺失亲本牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2基因组中的889、890、891、892、893、894连续6个基因，使得到的突变菌株的菌落形态变小，荚膜含量降低，对昆明小鼠的致病力显著减弱，对A型和B型多杀性巴氏杆菌具有良好的免疫保护作用，对F型多杀性巴氏杆菌菌株也能起到一定的保护作用，而且此突变能够稳定遗传，能够很好的用于防治多杀性巴氏杆菌感染。

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种牛源A型多杀性巴氏杆菌减毒株及其制备方法和应用。

背景技术

多杀性巴氏杆菌是一种重要的人畜共患致病菌，可导致多种家禽家畜，甚至人类患病，主要包括禽霍乱、猪的萎缩性鼻炎和肺疫、牛羊的出血性败血病和肺炎等。这给养殖业带来了巨大的经济损失，同时也威胁着人类的生命安全。

根据荚膜血清型不同，多杀性巴氏杆菌可分为A、B、D、E和F型五种血清型，A型主要引起牛肺炎。该病的防控主要以抗生素和疫苗为主，但是抗生素滥用存在耐药和环境污染等问题，疫苗防控是预防该病的主要措施。疫苗的制备一般采用减毒株制备得到。目前为止，国内尚无针对A型多杀性巴氏杆菌的有效疫苗，且不同血清型疫苗间交叉保护作用较差。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株，通过缺失野生型多杀性巴氏杆菌基因组中889，890，891，892，893和894这6个基因，降低了动物的致病力，同时对多种血清型多杀性巴氏杆菌具有一定的保护作用。

本发明提供了一种牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株，在牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2的基础上，缺失基因组中889，890，891，892，893和894基因。

优选的，889基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

890基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

891基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

892基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

893基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

894基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

本发明提供了所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2Δ889-894减毒株的构建方法，包括以下步骤：

以牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2的基因组DNA为模板，分别以引物Pm889-894U-F/Pm889-894U-R扩增Pm889-894基因的上游同源臂，用引物Pm889-894D-F/Pm889-894D-R扩增Pm889-894基因的下游同源臂；

将所述Pm889-894基因的上游同源臂和扩增Pm889-894基因的下游同源臂克隆至pUC19oriKan^R质粒中，得到缺失基因重组质粒pUC19oriKanRΔ889-894；

将所述缺失基因重组质粒pUC19oriKanRΔ889-894转化入PmCQ2感受态细胞中，得到PmCQ2Δ889-894。

优选的，所述引物Pm889-894U-F/Pm889-894U-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示。

优选的，所述引物Pm889-894D-F/Pm889-894D-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示。