[发明专利]肺癌标志物检测试剂盒及其制备方法与使用方法

权利要求书

1.一种肺癌标志物检测试剂盒，其特征在于，包括抗体蛋白和检测抗体，所述抗体蛋白包括CEA、NSE、SCCA、Cyfra211、ProGRP、CA125和CA199特异性抗体，所述检测抗体包括CEA、NSE、SCCA、Cyfra211、ProGRP、CA125和CA199特异性抗体。

2.根据权利要求1所述的肺癌标志物检测试剂盒，其特征在于，还包括固相载体，所述抗体蛋白固定于所述固相载体上，所述固相载体包括酶标板微孔、磁珠、亲和膜或液相芯片，所述液相芯片包括聚苯乙烯荧光编码微球。

3.根据权利要求1所述的肺癌标志物检测试剂盒，其特征在于，还包括聚苯乙烯荧光编码微球和藻红蛋白，每个所述聚苯乙烯荧光编码微球与一种抗体蛋白结合形成抗体偶联微球复合物，每份所述藻红蛋白与一种所述检测抗体偶联形成藻红蛋白偶联抗体复合物。

4.根据权利要求3所述的肺癌标志物检测试剂盒，其特征在于，所述抗体偶联微球复合物中，每50-150μg所述抗体蛋白包被在1×10⁶个所述聚苯乙烯荧光编码微球上。

5.根据权利要求3所述的肺癌标志物检测试剂盒，其特征在于，所述藻红蛋白偶联抗体复合物中，所述检测抗体与所述藻红蛋白的摩尔比为1:0.8-1:1.2。

6.根据权利要求1所述的肺癌标志物检测试剂盒，其特征在于，还包括样品稀释液、反应缓冲液、洗涤缓冲液，所述样品稀释液包括三羟甲基氨基甲烷和防腐剂，所述反应缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷、防腐剂和聚山梨醇酯-20，所述洗涤缓冲液包括磷酸盐和聚山梨醇酯-20。

7.一种权利要求1所述的肺癌标志物检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述肺癌标志物检测试剂盒还包括聚苯乙烯荧光编码微球和藻红蛋白，每个所述聚苯乙烯荧光编码微球与一种抗体蛋白结合形成抗体偶联微球复合物，每份所述藻红蛋白与一种所述检测抗体偶联形成藻红蛋白偶联抗体复合物，所述制备方法包括以下步骤：

在若干份不同的所述聚苯乙烯荧光编码微球中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基硫代琥珀酰亚胺和不同所述抗体蛋白后，在室温下反应4-6小时，去除多余所述抗体蛋白后加入脱脂奶粉封闭20-40分钟，然后去除所述脱脂奶粉，以分别得到不同所述抗体偶联微球复合物；

将不同的所述抗体偶联微球复合物混合，配制成捕获微球混合液；

在不同所述检测抗体中分别加入所述藻红蛋白，控制所述检测抗体与所述藻红蛋白的摩尔比均为1:0.8-1:1.2，在室温下避光反应后，分别得到不同所述藻红蛋白偶联抗体复合物；

将不同的所述藻红蛋白偶联抗体复合物混合，配制成检测抗体混合液。

8.一种权利要求1所述的肺癌标志物检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述肺癌标志物检测试剂盒还包括聚苯乙烯荧光编码微球和藻红蛋白，每个所述聚苯乙烯荧光编码微球与一种抗体蛋白结合形成抗体偶联微球复合物，每份所述藻红蛋白与一种所述检测抗体偶联形成藻红蛋白偶联抗体复合物，所述使用方法包括以下步骤：

步骤S1：将不同的所述抗体偶联微球复合物混合，得到捕获微球混合液，向样本管中加入所述捕获微球混合液和待测样本，将所得混合物在室温下避光孵育；

步骤S2：将不同的所述藻红蛋白偶联抗体复合物混合，配制成检测抗体混合液，将所述步骤S1所得的混合物中加入所述检测抗体混合液，在室温下避光孵育，得到待检测混合物；

步骤S3：在流式细胞仪上检测所述待检测混合物的荧光类型和荧光强度。