[发明专利]一种蟹肉DNA提取试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种蟹肉DNA提取试剂盒及提取方法，属于分子生物学领域。所述试剂盒包括裂解液，所述裂解液包括SDS、蛋白酶K和RNase A。本发明的试剂盒组份简单，易于配制，成本低，无毒性。本发明的提取方法简便，易于操作，能够快速提取蟹肉DNA，进而能够促进水产养殖产业的高质量、可持续发展。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体地，涉及一种蟹肉DNA提取试剂盒及提取方法。

背景技术

中国作为水产养殖大国，其水产品总产量占到了世界的三分之一，水产养殖产量占世界水产养殖产量的约60％。而水产业的快速发展离不开生物技术的支撑。分子生物学的方法通过追溯生物基因的核苷酸序列，研究其结构与功能，有助于探索水产品的育种与繁殖、疾病与免疫等。尤其是人们对水产食品的喜爱，使得越来越多的研究热点聚焦于水产生物的育种与养殖上。目前，水产养殖存在一些问题，如遗传改良品种少、病害严重、育种率低等。

合格的样本DNA应具有核酸一级结构的完整性，以及减少RNA、蛋白质、多糖的污染等。水产生物生物中，如蟹类，其肌肉松散易碎，且含有较高的蛋白质等。由于其与陆地生物不同细胞与组织的特点，常规的DNA提取方法无法获得高质量的蟹肉DNA。

发明内容

为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种蟹肉DNA提取试剂盒，包括裂解液，所述裂解液包括SDS、蛋白酶K和RNase A。

在本发明的一些实施方案中，所述裂解液中包括0.6～2.4％的SDS、2％的蛋白酶K和1％的RNase A。

在本发明的一些优选实施方案中，所述裂解液中包括1％的SDS、2％的蛋白酶K和1％的RNase A。

在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒还包括漂洗液和洗脱液。

在本发明的一些实施方案中，所述漂洗液为有机醇溶液。在本发明的一些优选实施方案中，所述漂洗液为80％乙醇。

在本发明的一些实施方案中，所述洗脱液选自TE缓冲液、Tris-HCl缓冲液和水中的一种。在本发明的一些优选实施方案中，所述洗脱液为10mM Tris-HCl。

在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒还包括蛋白酶K。

本发明第二方面提供一种蟹肉DNA提取试剂盒提取蟹肉DNA的方法，包括以下步骤：

S1，在含有钢珠的磨样管中加入本发明第一方面所述的裂解液，取适量蟹肉于磨样管中，使用研磨仪50Hz，打磨1～3min；；

S2，将磨样管置于65℃水浴锅中13～15min；

S3，将磨样管置于70℃水浴锅中13～15min；

S4，将磨样管放入离心机8000～10000g离心10～15min，转上清至新的离心管中；

S5，加入0.5倍体积的氯仿，颠倒混匀直至溶液完全乳化成白色后，在12000～15000×g，4℃条件下离心8～15min；

S6，吸取上清液转移至新的灭菌离心管中；

S7，向上清液中加入0.6倍体积混合均匀的磁珠，吹打混匀，室温静置3～8min；

S8，将离心管置于磁力架，直至溶液澄清，吸弃上清；

S9，保持离心管在磁力架上，加入200μL漂洗液，室温静置20～40s后，吸弃上清；

S10，瞬时离心，弃尽离心管中多余的漂洗液，室温干燥磁珠2～5min；