[发明专利]一种化疗协同用药曼那斯汀药剂的试验方法

权利要求书

1.一种化疗协同用药曼那斯汀药剂的试验方法，包括动物实验方法，其特征在于：所述动物实验方法包括曼那斯汀药剂缓解化疗药物奥沙利铂的消化道毒副试验，曼那斯汀药剂协同奥沙利铂治疗原发性肝癌试验；

所述曼那斯汀药剂缓解化疗药物奥沙利铂的消化道毒副试验具体步骤包括：

S1，曼那斯汀药物的制作，将50％甘露糖、25％沙己酸钠和25％三氯蔗糖溶解在溶液中，调节PH值为8.5-9.5之间，搅拌20分钟后加工形成曼那斯汀药剂；

S2，药物联合注射试验鼠：将SPF级的C57BL/6试验鼠，随机分成4个小组：对照组Ctrl、曼那斯汀组Manostin、奥沙利铂组Oxaliplatin组、奥沙利铂组Oxaliplatin和曼那斯汀/奥沙利铂联合处理组Oxaliplatin+Manostin，对试验鼠进行灌胃观察；曼那斯汀药剂是灌胃处理

S3，测量试验鼠的直肠长度；将4组试验鼠在灌胃药物7天后，通过二氧化碳窒息法处死，解剖取出4组试验鼠的结直肠进行长度测量；

S4，将试验鼠的小肠从腹腔中及时取出进行组织化学染色分析：对试验鼠小肠经清除脂肪组织、预冷冲洗、脱水、切片和染色晾干的步骤后封片镜检；

S5，获得镜检小肠生理结构变化，应用Graphpad prism 9统计软件对所得的数据进行统计分析。

2.根据权利要求1所述的一种化疗协同用药曼那斯汀药剂的试验方法，其特征在于：所述S2步骤具体方法为：

1)、挑选40只年龄为8周的试验鼠分为4组，4组试验鼠饲养环境保持光照12小时，黑夜12小时；

2)、处于对照组中的试验鼠每天获得800μL磷酸缓冲液PBS灌胃，曼那斯汀组Manostin试验鼠每天获得800μL曼那斯汀溶液进行灌胃，曼那斯汀/奥沙利铂联合处理组Oxaliplatin+Manostin处理方式同曼那斯汀组Manostin组，每天灌胃一次，处理时间设置为5天；

3)、处于奥沙利铂组Oxaliplatin和曼那斯汀/奥沙利铂联合处理组Oxaliplatin+Manostin试验鼠在预处理后一天进行奥沙利铂Oxaliplatin处理，方式为腹腔注射，处理剂量为16mg/kg。

3.根据权利要求1所述的一种化疗协同用药曼那斯汀药剂的试验方法，其特征在于：所述S3步骤中具体方法为：将4组试验鼠在奥沙利铂Oxaliplatin处理4天后，通过二氧化碳窒息法处死，解剖取出四组试验鼠的结直肠进行长度测量。

4.根据权利要求1所述的一种化疗协同用药曼那斯汀药剂的试验方法，其特征在于：所述S4步骤中具体方法为：

1)、将小肠表面粘连的脂肪组织和淋巴组织去除干净，预冷过的PBS冲洗肠道内部，截取小肠10cm长度的肠段，竖向剪开后卷成“瑞士卷”状，形成肠段；

2)、固定好造型的所述肠段在4％多聚甲醛溶液内进行固定12—24小时，随后进行组织脱水，石蜡包埋；

3)、包埋完毕的所述肠段利用石蜡切片机进行切片，厚度为4μm；

4)、所述肠段切片进行脱蜡复水；

5)、进行苏木精和伊红对所述肠段进行染色，染色后晾干，后封片镜检。

5.根据权利要求1所述的一种化疗协同用药曼那斯汀药剂的试验方法，其特征在于：所述曼那斯汀药剂协同奥沙利铂治疗原发性肝癌试验方法的具体步骤为：

步骤一，试验鼠处理：向出生14天的试验鼠腹腔注射二乙基亚硝胺(DEN，溶解在PBS中)，剂量为25mg/kg，随后的每周腹腔注射四氯化碳(CCL₄，溶于玉米油中)，剂量为0.5mL/kg，持续3～4个月，直至诱导出试验鼠原发肝癌；

步骤二，诱导完毕的试验鼠分组：分为4组，即对照组、曼那斯汀组、奥沙利铂组和曼那斯汀/奥沙利铂组，试验鼠饲养环境保持光照12小时，黑夜12小时；

步骤三，对诱导完毕的试验鼠进行输送混合药剂，持续用药不低于30天；

步骤四，解剖取出四组试验鼠的肝脏，进行肝脏肿瘤数量计数统计；

步骤四，试验鼠肝脏肿瘤组织进行化学染色分析，并获取曼那斯汀药剂对奥沙利铂治疗肝癌影响试验结果。