[发明专利]一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌，其特征在于：由以下方法构建而成：

(1)以E.coli THR为底盘菌，将菌株E.coli THR基因组中的ptsG基因用ilvA*基因及leuDH基因替换，得到重组菌株E.coli THR△ptsG::ilvA*-leuDH；

(2)将菌株E.coli THR△ptsG::ilvA*-leuDH接种到2-酮丁酸液体培养基中进行传代培养，筛选能在2-酮丁酸浓度不低于50g/L的液体培养基中正常生长的菌株，得到菌株E.coli THR△ptsG::ilvA*-leuDHMut；

(3)将菌株E.coli THR△ptsG::ilvA*-leuDHMut基因组中相邻的ltaE基因及poxB基因用leuDH基因替换，得到重组菌株E.coli THR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH；

(4)将菌株E.coli THR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH基因组中的focA基因及pflB基因敲除，得到重组菌株E.coli THR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH△focA△pflB；

(5)将菌株E.coli THR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH△focA△pflB基因组中相邻的pta基因及ackA基因用ilvA*基因和leuDH基因替换，得到重组菌株E.coliTHR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH△focA△pflB△pta△ackA::ilvA*-leuDH；

(6)将菌株E.coli THR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH△focA△pflB△pta△ackA::ilvA*-leuDH基因组中的mgsA基因用ilvA*基因和leuDH基因替换，得到重组菌株E.coli THR△ptsG::ilvA*-leuDHMut△ltaE△poxB::leuDH△focA△pflB△pta△ackA::ilvA*-leuDH△mgsA::ilvA*-leuDH，即所述高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌。

2.如权利要求1所述的一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌，其特征在于：所述ilvA*基因序列如SEQ ID No.1所示。

3.如权利要求1所述的一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌，其特征在于：所述leuDH基因为亮氨酸脱氢酶编码基因。

4.如权利要求1或3所述的一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌，其特征在于：所述leuDH基因序列如SEQ ID No.2所示。

5.如权利要求1所述的一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌，其特征在于：所述ptsG基因序列如SEQ ID No.3所示。

6.如权利要求1所述的一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌，其特征在于：所述ltaE基因序列如SEQ ID No.4所示，所述poxB基因序列如SEQ ID No.5所示。

7.如权利要求1所述的一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌，其特征在于：所述focA基因序列如SEQ ID No.6所示，所述pflB基因序列如SEQ ID No.7所示。

8.如权利要求1所述的一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌，其特征在于：所述pta基因序列如SEQ ID No.8所示，所述ackA基因序列如SEQ ID No.9所示。

9.如权利要求1所述的一种高产L-2-氨基丁酸的无质粒基因工程菌，其特征在于：所述mgsA基因序列如SEQ ID No.10所示。

10.如权利要求1-9之一所述的无质粒基因工程菌在微生物发酵制备L-2-氨基丁酸中的应用。