[发明专利]对有毒蘑菇种类进行常规/实时荧光/数字PCR鉴定的试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种对有毒蘑菇种类进行常规/实时荧光/数字PCR鉴定的试剂盒和方法，试剂盒包括用于对有毒蘑菇进行PCR鉴定的引物组，有毒蘑菇包括选自假褐云斑鹅膏、锥鳞白鹅膏、新苦粉孢牛肝菌中的一种或多种，试剂盒用于对不同种类的有毒蘑菇进行种类鉴定。本发明选取常见的有毒蘑菇及其近缘种和形态近似种，通过序列比对，找到有毒蘑菇与其近似物种的差异位点，设计特异性引物，能准确地将有毒蘑菇与其它近似种和易混淆种区分开来；通过灵敏度检测，保证所建立的检测方法可满足中毒事件中早期、准确诊断，从而尽快对症使用解毒剂。

技术领域

本发明涉及蘑菇种质鉴定技术领域，具体涉及对有毒蘑菇种类进行常规/实时荧光/数字PCR鉴定的试剂盒和方法。

背景技术

一些有毒菌类与可食菌类外形相似、且生长季节和生长环境相同，混杂生长在一起，容易被人当成可食菌类采用。而误食野生毒蘑菇可能会造成急性肝损害、急性肾衰竭、肠胃炎等严重后果。

常见野生毒蘑菇中，鹅膏科(Amanitaceae)鹅膏属(Amanita)部分真菌因含有鹅膏肽类毒素而具有致毒性，如致命鹅膏(Amanita exitialis)，俗名“白毒伞”，该种被科学界认为是“剧毒杀手”，可以造成急性肝损害。

在误食有毒蘑菇急救中存在事发突然、形态学鉴定难等棘手难题，且目前我国对有毒生物危害整体关注与研究较少，没有形成成熟的检测鉴定技术方法、试剂和标准，无法及时诊断出中毒原因，给人民生命安全和健康带来了重大隐患。所以，开展有毒蘑菇快速定性检测技术研究具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种对有毒蘑菇种类进行常规/实时荧光/数字PCR鉴定的试剂盒，具体技术方案如下：

本发明为了实现其目的，采用的技术方案是：

一种对有毒蘑菇进行PCR鉴定的试剂盒，包括用于对有毒蘑菇进行PCR分子鉴定的特异性引物，

所述有毒蘑菇包括选自假褐云斑鹅膏、锥鳞白鹅膏、新苦粉孢牛肝菌中的一种或多种；

所述有毒蘑菇对应的特异性引物如下表所列：

上述的试剂盒还包括用于实时荧光PCR的特异性TaqMan探针，每种有毒蘑菇对应的TaqMan探针如下表所示：