[发明专利]一种PRV变异株灭活疫苗及制备方法

说明书

本发明公开了一种PRV变异株灭活疫苗及制备方法，属于PRV疫苗制备技术领域，包括PRVFJ/tiger/2015株灭活病毒液、β‑丙内酯和MONTANIDE ISA201VG；制备过程包括：制备PRVFJ/tiger/2015株病毒液，向病毒液中加入β‑丙内酯，使β‑丙内酯的终浓度为0.1％，灭活、水浴终止灭活，得灭活完全的病毒液；将灭活完全后的病毒液与佐剂MONTANIDEISA201VG按照1:1质量比混合，进行乳化，得到PRV变异株灭活疫苗。

技术领域

本发明涉及PRV疫苗制备技术领域，更具体地说是涉及一种PRV变异株灭活疫苗及制备方法。

背景技术

2015年6月，对福建梅花山华南虎繁育研究所发生的一例不明原因死亡成年虎进行死亡原因调查的过程中，发现该死亡虎肝脏、脾脏和肺脏组织均呈PRV阳性，并从死亡虎肺脏组织中成功分离到一株伪狂犬病毒，命名为FJ/tiger/2015，这是世界首例关于PRV感染珍稀濒危保护动物华南虎的病例。2016年3月，又发生一例不明原因急性死亡华南虎幼虎，在进行死亡原因调查的过程中，发现该死亡小虎脑、肝脏、脾脏、粪便病料均呈PRV阳性，并自死亡虎病料中再次成功分离到一株伪狂犬病毒，命名为FJ/tiger/2016。目前，正在开展福建梅花山华南虎种群PRV流行病学调查与朔源工作。这些结果表明，伪狂犬病毒已对福建梅花山华南虎种群造成了严重威胁，华南虎伪狂犬病的防控工作已经迫在眉睫。

PRV疫苗在家猪PR防控中应用广泛，并取得了很好效果，然而驯养繁殖和救护的野生动物均在PRV疫苗免疫方面十分的欠缺。虽然PRV病毒只有一个血清型，但是存在多个不同的基因型，且不同物种来源的PRV的致病性存在较大差异，而现在应用的猪伪狂犬病疫苗对这些圈养野生动物是否能起到免疫效果是个未知，考虑到疫苗的免疫风险和野生动物的对伪狂犬疫苗的敏感性，市面上销售的疫苗是否可以应用都是十分值得研究探讨的问题。

因此，如何基于PRV变异毒株制备灭活疫苗，以对野生动物进行免疫是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种PRV变异株灭活疫苗，变异株从野生华南虎体内分离得到，制备得到的疫苗可以有效预防野生动物感染PRV。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种PRV变异株灭活疫苗，包括猪伪狂犬病毒PRV FJ/tiger/2015灭活病毒液、β-丙内酯和MONTANIDE ISA 201VG；所述猪伪狂犬病毒PRV FJ/tiger/2015病毒保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:V202310，保藏日期为2023.02.21，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。

作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护PRV变异株灭活疫苗的制备方法，包括下述过程：

1)制备猪伪狂犬病毒PRV FJ/tiger/2015灭活病毒液，向病毒液中加入β-丙内酯，使β-丙内酯的终浓度为0.1％，灭活、水浴终止灭活，得灭活完全的病毒液；

2)将灭活完全后的病毒液与佐剂MONTANIDE ISA 201VG按照1:1质量比混合，进行乳化，得到PRV变异株灭活疫苗。

优选地，猪伪狂犬病毒PRV FJ/tiger/2015灭活病毒液的制备过程为：

将PRV FJ/tiger/2015株按1％比例接种至长满单层的vero细胞，置37℃，5％CO₂培养12-48h，当细胞病变达到80％以上，收获产生CPE的培养物，-80℃反复冻融3次，经离心后收取病毒液，分装后-80℃冰箱保存，得猪伪狂犬病毒PRV FJ/tiger/2015灭活病毒液。

优选地，步骤1)中，灭活、终止灭活为：将制备疫苗用的病毒液，加入终浓度为0.1％的β-丙内酯，4℃灭活24h，灭活期间每隔4-6h摇匀病毒液一次，37℃，水浴2h，终止灭活。