[发明专利]一种用于预测早期慢阻肺的生物标志物及其应用和筛选方法

说明书

本发明公开了一种用于预测早期慢阻肺的生物标志物及其应用和筛选方法，所述生物标志物为环状RNA：circFCHO2。本发明通过RNA‑seq技术筛查慢阻肺患者外周血样本中全血RNA的环状RNA差异表达，并选择部分circRNA通过实时荧光定量PCR验证，通过上述方式寻找慢阻肺发生发展的circRNA：circFCHO2作为COPD早期诊断的生物标志物。本发明中生物标志物circFCHO2在慢阻肺诊断中的应用，具有较高临床使用和推广价值，为临床治疗提供指导思路。

技术领域

本发明涉及临床检验诊断技术领域，尤其涉及一种用于预测早期慢阻肺的生物标志物及其应用和筛选方法。

背景技术

慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD，慢阻肺)是一种受遗传和环境因素影响的异质性疾病。

目前，临床上对慢阻肺的诊断主要依赖肺功能检查结果，对急性加重期的判定依据临床症状的描述，过程操作复杂、检查费用较高且缺乏量化标准。慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2021年修订版)中的诊断部分并未提供一种生物标志物来辅助量化诊断、严重程度评估及判断急性加重的病因和预后。COPD的治疗主要依靠内科治疗，常用于急性加重期治疗的三类药物是支气管扩张剂、抗生素和糖皮质激素。这些药物可以通过扩张支气管等来善症状、减轻恶化，但它们不针对具体发病机制。此外，没有研究表明这些药物能改善患者的肺功能、用药依从性和长期生活质量。且长期药物控制可导致耐药性和不良反应，如免疫抑制、骨质疏松、青光眼、白内障等。因此，需要寻找一种生物标志物来用于早期诊断慢阻肺。

发明内容

慢性阻塞性肺病(COPD)早期的预测因子和靶向治疗手段尤为重要。非编码RNAs在COPD中的异常表达已经被发现。然而，几乎没有COPD的研究系统分析不同RNA转录组间的相互作用。因此，在本发明中检测了COPD患者RNA-Seq中RNA转录本的表达，并筛选出与慢阻肺相关的生物标志物。

为实现以上目标，本发明的具体技术方案为：

本发明的第一个目的在于，提供一种用于预测早期慢阻肺的生物标志物，所述生物标志物为环状RNA：circFCHO2。

本发明的第二个目的在于，提供如上所述的生物标志物在制备用于预测或诊断慢阻肺风险的产品中的应用。

本发明的第三个目的在于，提供如上所述的生物标志物的筛选方法，包括：

步骤(a)、收集慢阻肺患者和健康对照者的新鲜外周血标本，进行全血RNA提取，对提取的全血RNA进行OD260/280值的检测，数值在1.8-2.0认为RNA纯度达标；

步骤(b)、对全血RNA进行处理构建circRNA文库，并利用高通量测序检测circRNA的表达，筛选出差异表达的环状RNA：P0.05和|log2(fold change)|≥1，挑选circFCHO2作为预测慢阻肺的生物标志物；

步骤(c)、扩大样本对circFCHO2经行qRT-PCR验证。

进一步地，步骤(b)的具体方法如下：

1)COPD和健康受试者的RNA首先经过去除核糖体RNA处理，circRNA建库需要提前使用RNase R酶消化掉线性RNA。将去核糖体的RNA打断成250～300bp的小片段，以该小片段为模板，逆转录为cDNA，最后通过PCR扩增建立文库；

2)将建立好的文库进行Qubit 2.0定量、Agilent 2100片段大小分析、qRT-PCR文库丰度定量等质控检测合格后，利用Illumina novaseq 6000平台进行高通量测序。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：