[发明专利]一种氨肽酶及其编码基因

说明书

本发明公开了一种氨肽酶及其编码基因，所述氨肽酶是一种来源于Bacillus licheniformis YN的氨肽酶序列，属于食品酶工程领域。本发明从Bacillus licheniformis YN发酵液中纯化获得电泳纯的氨肽酶，经测定，该氨肽酶对底物亮氨酸‑对硝基苯胺，蛋氨酸‑4‑硝基苯胺，L‑脯氨酸‑4‑硝基苯胺，L‑赖氨酸‑4‑硝基苯胺，L‑精氨酸‑4‑硝基苯胺，L‑缬氨酸‑4‑硝基苯胺，L‑苯丙氨酸‑4‑硝基苯胺均具有催化活性，其中催化活性最高的底物依次为脯氨酸、亮氨酸和赖氨酸，以Leu‑pNA为底物时，其比酶活达到1125U/mg。利用MALDI‑TOF‑MS分析该酶序列，设计引物对该氨肽酶基因进行克隆，获得该酶的核酸和蛋白质序列，为高催化效率氨肽酶的工业应用奠定基础。

技术领域

本发明属于食品酶工程技术领域，具体涉及一种氨肽酶及其编码基因。

背景技术

氨肽酶(Aminopeptidases，简称APs，EC3.4.11)是一类能从蛋白质和多肽N端选择性切除氨基酸残基产生游离氨基酸的外切蛋白酶。一些蛋白质酶解时，肽链中含有的单个或多个疏水氨基酸的多肽链，少部分也存在羧基末端携带的疏水氨基酸暴露出来，被称为苦味肽，苦味成为大豆蛋白水解物或多肽在食品领域应用的主要障碍。

目前，蛋白脱苦主要有物理法、化学法及生物法。酶法生物脱苦因绿色、环保、过程可控等优势，广泛运用到蛋白脱苦中，其中氨肽酶是最为常用的脱苦酶之一，它通过水解肽的N末端疏水氨基酸残基来缓解蛋白苦味。氨肽酶具有降低酪蛋白和大豆蛋白等蛋白水解液苦味的用途，被广泛应用于食品加工等行业。

现有的氨肽酶普遍存在产量低、酶活力较差等问题。在食品加工等领域缺乏高催化活性的氨肽酶。因此，制备获得高催化性能的氨肽酶对食品蛋白的高附加值加工具有意义。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种氨肽酶及其编码基因，具体是来源于地衣芽孢杆菌YN(Bacillus licheniformis YN)的高催化活性氨肽酶BlynAPs，对于Leu-pNA具有较高的比酶活。

技术方案：为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明涉及一种氨肽酶及其编码基因，所述氨肽酶是一种来源于Bacilluslicheniformis YN的氨肽酶序列，属于食品酶工程领域。本发明首先从Bacilluslicheniformis YN发酵液中纯化获得电泳纯的氨肽酶，经测定，该氨肽酶对底物亮氨酸-对硝基苯胺，蛋氨酸-4-硝基苯胺，L-脯氨酸-4-硝基苯胺，L-赖氨酸-4-硝基苯胺，L-精氨酸-4-硝基苯胺，L-缬氨酸-4-硝基苯胺，L-苯丙氨酸-4-硝基苯胺均具有催化活性，其中催化活性最高的底物依次为脯氨酸、亮氨酸和赖氨酸，并且以Leu-pNA为底物时，其比酶活达到1125U/mg。利用MALDI-TOF-MS分析该酶序列，设计引物对该氨肽酶基因进行克隆，获得该酶的核酸和蛋白质序列，为高催化效率氨肽酶的工业应用奠定基础。

本申请的第一个目的是，提供一种氨肽酶，所述氨肽酶的氨基酸序列是如下(a)或(b)：

(a)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(b)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加的由SEQ ID NO.1衍生的氨肽酶。

可选的，作为本申请的一种实施方式，以亮氨酸-对硝基苯胺Leu-pNA为底物时，所述氨肽酶的比酶活为1125U/mg。

可选的，作为本申请的一种实施方式，以脯氨酸-4-硝基苯胺Pro-PNA为底物时，所述氨肽酶的比酶活为1395U/mg。

可选的，作为本申请的一种实施方式，以赖氨酸-4-硝基苯胺Lys-pNA为底物时，所述氨肽酶的比酶活为911U/mg。