[发明专利]细胞获得性转移诱导结肠炎的方法

说明书

本发明公开一种细胞获得性转移诱导结肠炎的方法，涉及生物医药技术领域，该细胞获得性转移诱导结肠炎的方法包括如下步骤：S1、结肠炎模型复制：S2、流式分选富集mTh17细胞：S3、mTh17细胞获得性转移诱导结肠炎：S4、结肠炎样品采集：S5、疾病活动指数评定：S6、病理组织的处理：一、石蜡切片；二、苏木素‑伊红染色；通过本申请提供的一种细胞获得性转移诱导结肠炎的方法，在体外获得高表达IL‑17A的记忆性Th17细胞；mTh17细胞获得性转移至SCID小鼠成功诱导结肠炎；这有助于解析mTh17细胞在UC发病中的作用机制，可用于评价新型抗UC药物的疗效，促进新型抗UC药物的开发。

技术领域

本发明涉及生物医药领域技术，尤其是指一种细胞获得性转移诱导结肠炎的方法。

背景技术

溃疡性结肠炎是一种慢性免疫介导的结肠炎症，其症状具有复发、缓解交替的特征；据报道，全球UC发病率一直处上升趋势，北美、欧洲的发病率分别为8.8-23.1/10万人/年、0.6-24.3/10万人/年，亚洲略低，其慢性且高复发率造成了巨大的医疗保健和社会成本；UC好发于15至30岁的中青年，主要临床症状为腹痛、腹泻、体重减轻，目前仍未找到能够彻底治愈UC的药物和方法，亦不清楚其具体病因和确切发生机制；当前，医学界公认过度的Th17细胞反应是UC启动和缓解的关键因素；然而，在体外很难直接获取Th17细胞，UC临床上难以彻底治愈且反复发作，这与记忆性T细胞对同源性抗原异常的免疫反应密切相关，而mTh17是记忆性T细胞的典型代表；如何在体外获得高表达IL-17A的记忆性Th17细胞，明确mTh17细胞获得性转移至SCID小鼠诱导结肠炎的方法，可以解析mTh17细胞在UC发病中的作用机制，能够用于评价新型抗UC药物的疗效，促进新型抗UC药物的开发。

发明内容

有鉴于此，本发明针对现有技术存在之缺失，其主要目的是提供一种细胞获得性转移诱导结肠炎的方法，其通过本申请提供的一种细胞获得性转移诱导结肠炎的方法，在体外获得高表达IL-17A的记忆性Th17细胞；mTh17细胞获得性转移至SCID小鼠成功诱导结肠炎；用于评价新型抗UC药物的疗效，促进新型抗UC药物的开发。

为实现上述目的，本发明采用如下之技术方案：

一种细胞获得性转移诱导结肠炎的方法，其包括如下步骤：

S1、结肠炎模型复制：BALB/c小鼠依次自由饮用2.5％的DSS溶液、自由饮水以及自由饮用2.5％的DSS溶液；

S2、流式分选富集mTh17细胞：处理BALB/c小鼠得到单细胞悬液；染色缓冲液重悬细胞，400g/min离心4min弃上清，重复2次；染色缓冲液重悬细胞，受体阻断剂封闭；分别加入流式抗体，室温避光孵30min；染色缓冲液重悬细胞，400g/min离心4min弃上清2次；染色缓冲液定容，经流式分选仪检测后，收集管富集结肠炎小鼠mTh17细胞；

S3、mTh17细胞获得性转移诱导结肠炎：SCID小鼠适应性饲养后，随机均分成PBS和mTh17组，mTh17组腹腔注射细胞混合液，PBS组注射等体积的PBS溶液；

S4、结肠炎样品采集：收集小鼠结肠并预处理；将结肠组织滤纸吸干后称重；取近端结肠置于4％多聚甲醛溶液中固定24h，余下组织液氮速冻后转移至-80℃冰箱备用；

S5、疾病活动指数评定：实验过程中，小鼠称重及观察粪便粘稠度、便血情况，根据体重损失、粪便粘稠度和便血情况的评定疾病活动指数；