[发明专利]一种凡纳滨对虾肝肠胞虫抗性性状的组合分子标记、KASP检测引物及应用

权利要求书

1.一种与凡纳滨对虾抗肝肠胞虫性状相关的分子标记组合，其特征在于，位于凡纳滨对虾基因组未特征化基因LOC113820209上游P₃₅₈位点和P₃₃₉位点，所述的P₃₅₈位点位于凡纳滨对虾基因组Scaffold片段NW_020870611.1第549245碱基，所述碱基为C/T；所述的P₃₃₉位点位于凡纳滨对虾基因组Scaffold片段NW_020870611.1第549264碱基，所述碱基为T/C；

当P₃₅₈位点和P₃₃₉位点的基因型组合为T/T、C/C时，凡纳滨对虾对肝肠胞虫抗性较强，当P₃₅₈位点和P₃₃₉位点的基因型组合为其它类型时，凡纳滨对虾对肝肠胞虫敏感。

2.用于扩增权利要求1所述分子标记组合的引物组，其特征在于，所述的引物组由检测P₃₅₈位点基因型的引物组和检测P₃₃₉位点基因型的引物组组成；

所述检测P₃₅₈位点基因型的引物组如下：

549245F1：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCGGTACAAGGAAAGGAACAGGGACC；

549245F2：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCGGTACAAGGAAAGGAACAGGGACT；

549245R：GGTAACTCCGTGCATCAACAAGACTGTAT；

所述检测P₃₃₉位点基因型的引物组如下：

549264F1：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGGGACCGTGTCTTATACAGTCTTGT；

549264F2：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGGACCGTGTCTTATACAGTCTTGC；

549264R：CCATTTTCTGTTTCTCGGTAACTCCGTGC。

3.权利要求2所述的引物组在制备凡纳滨对虾肝肠胞虫抗性性状检测的试剂盒中的应用。

4.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求2所述的引物组。

5.权利要求1所述的分子标记组合、权利要求2所述的引物组或权利要求4所述的试剂盒在凡纳滨对虾肝肠胞虫抗性性状分子检测中的应用。

6.权利要求1所述的分子标记组合、权利要求2所述的引物组或权利要求4所述的试剂盒在凡纳滨对虾分子遗传育种中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，是在凡纳滨对虾肝肠胞虫抗性育种中的应用。

8.一种检测凡纳滨对虾肝肠胞虫抗性性状的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)获得待测样品基因组DNA；

(2)以基因组DNA为模板，利用权利要求2所述的引物组进行PCR扩增；

(3)收集每个反应孔产生的荧光信号，根据荧光信号的类型判断分子标记的基因型，进而确定凡纳滨对虾对肝肠胞虫的抗性。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，对P₃₅₈位点进行基因型的荧光检测：

若仅检测到FAM荧光，则P₃₅₈位点为C/C纯合基因型；

若仅检测到HEX荧光，则P₃₅₈位点为T/T纯合基因型；

若同时检测到FAM和HEX荧光，则P₃₅₈位点为C/T杂合子。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，对P₃₃₉位点进行基因型的荧光检测：

若仅检测到FAM荧光，则P₃₃₉位点为T/T纯合基因型；

若仅检测到HEX荧光，则P₃₃₉位点为C/C纯合基因型；

若同时检测到FAM和HEX荧光，则P₃₃₉位点为T/C杂合子。