[发明专利]藜麦原生质体、制备方法以及梭梭耐逆基因瞬时表达体系

权利要求书

1.一种采用藜麦幼嫩叶片制备藜麦原生质体的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将预处理的藜麦幼嫩子叶切取成0.5～1mm宽的细长条后置于酶解液中，25℃恒温条件下避光酶解10.5h，50rpm·min^-1震荡1.5h，得到酶解液；其中，所述酶解液pH为5.7、酶解液组成为0.3％MacerozymeR-10+1.2％Cellulase-R10+0.6mol·L^-1甘露醇+20mmol·L^-1MES+20mmol·L^-1KCl+10mmol·L^-1CaCl₂+0.5％PVP+1g·L^-1BSA；

(2)往所述酶解液中添加等体积的W5水溶液，经100目筛网过滤，在室温、100×g速率下离心4min，弃上清液体，得到藜麦原生质体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)之后还包括步骤：

(3)往所得到的原生质体中添加W5水溶液重悬，在冰上放置30min，在室温、100×g速率下离心2min，弃上清液体，加入W5溶液重悬，得到提纯后的原生质体。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述藜麦幼嫩子为生长11天的藜麦幼嫩子，所述预处理为使用75％酒精进行消毒，并迅速晾干。

4.权利要求1～3任一项所述方法制备得到的藜麦原生质体。

5.一种基于权利要求4所述藜麦原生质体的梭梭耐逆基因瞬时表达体系。

6.如权利要求5所述的梭梭耐逆基因瞬时表达体系，其特征在于，所述耐逆基因包括HaFT-1基因，HaFT-1基因的表达蛋白定位在藜麦原生质体的细胞质中。