[发明专利]一种产泰乐菌素A的重组菌株及其生产泰乐菌素的方法

权利要求书

1.一种生产泰乐菌素的重组微生物，其中，所述重组微生物与野生型菌株或出发菌株相比，具有如下(a)和/或(b)所示的特性：

(a)增强了甲基转移酶酶活性和/或其编码基因的表达水平；

(b)增强了细胞色素P450单加氧酶酶活性和/或其编码基因的表达水平。

2.根据权利要求1所述的重组微生物，其中，利用启动子stnYp启动所述甲基转移酶编码基因和/或细胞色素P450单加氧酶编码基因的表达；

优选地，所述启动子stnYp包含如SEQ ID NO:1所示的序列。

3.根据权利要求2所述的重组微生物，其中，串联表达甲基转移酶编码基因和细胞色素P450单加氧酶编码基因，且以启动子stnYp启动所述甲基转移酶编码基因和细胞色素P450单加氧酶编码基因的表达。

4.根据权利要求1～3任一项所述的重组微生物，其中，

所述甲基转移酶包含如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的多肽，或包含与SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列具有至少90％，可选至少95％，优选至少97％，更优选至少98％，最优选至少99％的序列同一性的序列编码的，且具有或部分具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的多肽活性的多肽；和/或，

所述细胞色素P450单加氧酶包含如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的多肽，或包含与SEQID NO:4所示的核苷酸序列具有至少90％，可选至少95％，优选至少97％，更优选至少98％，最优选至少99％的序列同一性的序列编码的，且具有或部分具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的多肽活性的多肽。

5.根据权利要求1～4任一项所述的重组微生物，其中，以链霉菌或其他产泰乐菌素的菌株为出发菌株；优选地，以星海湾链霉菌(Streptomyces xinghaiensis)或其衍生菌株为出发菌株。

6.根据权利要求1～5任一项所述的重组微生物，其中，所述重组微生物为星海湾链霉菌(Streptomyces xinghaiensis)菌株T0771，其保藏编号为CCTCC NO:M 20222006。

7.一种多核苷酸，其包含：

(i)启动子stnYp的核苷酸序列；

(ii)甲基转移酶编码基因的核苷酸序列；

(iii)细胞色素P450单加氧酶编码基因的核苷酸序列。

8.一种表达载体，其包含如权利要求7所述的多核苷酸。

9.一种包含根据权利要求1～6任一项所述的重组微生物的细胞培养物。

10.根据权利要求1～6任一项所述的重组微生物，根据权利要求7所述的多核苷酸、根据权利要求7所述的表达载体、或根据权利要求8所述的细胞培养物在生产泰乐菌素中的应用。

11.一种生产泰乐菌素的方法，其中，包括培养根据权利要求1～6任一项所述的重组微生物细胞或根据权利要求8所述的细胞培养物，以培养后的重组微生物细胞或细胞培养物生产泰乐菌素的步骤。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，包括将所述菌株在含有碳源的发酵体系中培养根据权利要求1～6任一项所述的重组微生物细胞；

优选地，所述碳源包含可同化的碳源；

更优选地，所述碳源包括但不限于葡萄糖、黄豆饼粉、玉米浆、玉米粉、酵母提取物、棉子糖、蔗糖、甘露醇、肌醇、淀粉中的至少一种。

13.根据权利要求11或12所述的方法，其中，其还包括收获在所述体系中收集的泰乐菌素。