[发明专利]检测谷子抗除草剂基因紧密连锁的分子标记的方法

权利要求书

1.一种检测谷子抗咪唑乙烟酸除草剂基因紧密连锁的分子标记的方法，所述方法包括将待测核酸与Cas12i蛋白、gRNA和单链核酸检测器接触；所述gRNA包括与Cas12i蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列，所述与靶核酸杂交的导向序列如SEQ ID No.3-4任一所示；检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测谷子抗咪唑乙烟酸除草剂基因紧密连锁的分子标记。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Cas12i蛋白选自以下I-II任意一种：

I、所述Cas12i蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；

II、所述Cas12i蛋白的氨基酸序列与SEQ ID No.2相比，在对应于SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列的第790位氨基酸存在突变。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述与谷子抗咪唑乙烟酸除草剂基因紧密连锁的分子标记为SV9，所述分子标记SV9的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对待测核酸进行PCR扩增的步骤。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5，所述PCR扩增的下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNo.6所示。

6.一种用于检测谷子抗咪唑乙烟酸除草剂基因紧密连锁的分子标记的系统、组合物或试剂盒，所述系统、组合物或试剂盒包括权利要求1中所述的Cas12i蛋白、gRNA和单链核酸检测器。

7.根据权利要求6所述的系统、组合物或试剂盒，其特征在于，所述系统、组合物或试剂盒包括权利要求5中的引物。

8.权利要求6-7任一所述的组合物在检测谷子抗咪唑乙烟酸除草剂基因紧密连锁的分子标记中的应用。

9.权利要求6-7任一所述的组合物在谷子育种中的用途。