[发明专利]一种药用苦木组培快繁方法

权利要求书

1.一种药用苦木组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体选择：选择健壮、无病虫害、性状优良、含生物碱高的苦木植株进行伐桩或者环割促萌，待枝条萌芽长至1～2cm长时，喷施体积浓度0.3～0.5％多菌灵溶液，10～15天后于晴天采集当年生、活力旺盛的萌芽条作为外植体；

(2)外植体灭菌：将外植体剪去叶片和叶柄，保留5～6cm的萌芽条，将外植体表面清洗干净后，进行灭菌处理，灭菌结束后，吸干水分，备用；

(3)初代诱导培养：将灭菌后的外植体剪去茎段芽两端及创伤面，修剪成带1～2个的茎节或腋芽的茎段，以斜插式接种于初代诱导培养基上，每瓶1株，先暗培养5～10天，再在温度为23～26℃、光照强度为1500～2500LX、光照时间为10～12h/d下继续培养5～10天，获取初始芽；

(4)继代增殖培养：待初始芽高为3～6cm，剪掉老叶片，保留顶芽和部分叶柄，修剪成高度为1～2cm的单芽，转入配制好的继代增殖培养基中，每瓶5～8株，连续培养20～25天，获取继代丛芽；再次进行继代增殖培养时，将丛芽底部的愈伤组织切掉，切分成单芽或保留2～3个芽的小丛芽接种在继代增殖培养基中培养，每瓶5～8株/丛；

(5)生根培养：从继代丛芽中选取生长健壮、芽高≥1cm的单芽，在无菌条件下垂直插入配制好的生根培养基中，进行生根培养，每瓶插10～15株，培养15～20天，获取生长健壮的组培生根苗；

(6)炼苗移栽：待组培生根苗的根系长度≥1cm、根数3条以上时，将生长健壮的组培生根苗移到室外育苗大棚中进行炼苗5～10天，之后用清水洗掉根部培养基，移栽入已消毒好的基质育苗容器中，并进行苗木管理。

2.根据权利要求1所述的药用苦木组培快繁方法，其特征在于，步骤(3)中，所述初代诱导培养基包括以下组分：改良MS、0.3～0.5mg/L 6-BA、0.4～0.6mg/L NAA、0.4～0.6mg/LKT、3～5g/L琼脂、28～32g/L糖，pH为5.8～6.2。

3.根据权利要求1所述的药用苦木组培快繁方法，其特征在于，步骤(4)中，所述继代增殖培养基包括以下组分：改良MS、0.1～0.3mg/L 6-BA、0.1～0.3mg/L NAA、0.4～0.6mg/LIAA、0.7～0.9mg/L KT、3～5g/L琼脂、28～32g/L糖、0.01～0.02mg/L核黄素、0.005～0.02mg/L抗坏血酸，pH为5.8～6.2。

4.根据权利要求1所述的药用苦木组培快繁方法，其特征在于，步骤(5)中，所述生根培养基包括以下组分：1/2改良MS、0.4～0.6mg/L IBA、0.7～0.9mg/L IAA、0.04～0.06g/L活性炭、3～5g/L琼脂、14～16g/L糖，pH为5.8～6.2。