[发明专利]重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1毒株及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202310283149.4 | 申请日： | 2023-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN116515771A | 公开（公告）日： | 2023-08-01 |
| 发明（设计）人： | 申硕;汪梦俊;裴捷;于代冠;刘睿伦;周金戈;王泽鋆;郭靖;孟胜利 | 申请（专利权）人： | 武汉生物制品研究所有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/861;C12N15/40;C07K14/08;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 方晖 |
| 地址： | 430000 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 病毒 gii vp1 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一株重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1毒株，其特征在于，所述毒株命名为rAd5/NoV-GⅡ.4-VP1，已于2023年2月2日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202308。
2.权利要求1所述的重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1毒株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将诺如病毒的GII.4型病毒的VP1蛋白的基因序列插入到包含腺病毒5型的基因组的单拷贝质粒中构建重组质粒；
(2)将所述重组质粒经酶切线性化后，转染至哺乳动物细胞中进行传代培养，拯救出重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1，收集含病毒样颗粒的病毒收获液；
(3)对所述病毒收获液进行扩大培养、纯化，得到重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1毒株。
3.根据权利要求2所述的重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1毒株的制备方法，其特征在于，所述腺病毒5型为E1基因缺失的复制缺陷型病毒。
4.根据权利要求2所述的重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1毒株的制备方法，其特征在于，步骤(1)的方法包括以下步骤：通过PCR方法获取所述目的蛋白的基因及两侧的同源序列后，再通过PCR搭桥的方式将所述同源序列与所述目的蛋白的基因连接；将连接后的基因电转入已插入了λ-噬菌体Red重组酶基因并含有腺病毒5型载体的E.coli菌株中，热诱导后再经蓝白斑筛选即得到所述重组质粒。
5.根据权利要求2所述的重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1毒株的制备方法，其特征在于，步骤(2)的方法包括以下步骤：将所述重组质粒经Pac Ⅰ酶切后，利用LipofectamineTM2000转染哺乳动物细胞，拯救得到的病毒收获液记为P0代；将P0代病毒收获液在所述哺乳动物细胞上进行连续传代培养至P3代。
6.根据权利要求2所述的重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1毒株的制备方法，其特征在于，步骤(3)中的纯化包括以下步骤：将传代培养中获得的P3代病毒收获液在所述哺乳动物细胞的十层细胞工厂中培养、表达后，于-50℃/+25℃反复冻融3次，破碎细胞，释放病毒；将冻融后的细胞收获液离心，得到的上清经100kDa膜包过滤浓缩、蔗糖垫底后用CsCl溶液进行密度梯度离心；抽取目标条带经超速离心去除CsCl后得到纯化的病毒样颗粒原液。
7.权利要求1所述的重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1毒株表达的诺如病毒GII.4病毒样颗粒。
8.权利要求1所述的重组人腺病毒5型-诺如病毒GII.4-VP1毒株或权利要求7所述的诺如病毒GII.4病毒样颗粒在制备预防或/和治疗诺如病毒的产品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述预防或/和治疗诺如病毒的产品为诺如病毒GII.4型病毒疫苗。
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