[发明专利]用于检测肺腺癌的标记物、引物组以及试剂盒在审

申请号：	202310286796.0	申请日：	2023-03-23
公开（公告）号：	CN116144781A	公开（公告）日：	2023-05-23
发明（设计）人：	刘忠祥;孙关;孙知晓	申请（专利权）人：	刘忠祥
主分类号：	C12Q1/6886	分类号：	C12Q1/6886;C12N15/113
代理公司：	苏州九方专利代理事务所(特殊普通合伙) 32398	代理人：	张文婷
地址：	224008 江苏省盐城市盐都区人民南***	国省代码：	江苏;32
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摘要：
搜索关键词：	用于检测腺癌标记引物以及试剂盒
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【权利要求书】：

1.一种用于检测肺腺癌的标记物，其特征在于，所述标记物为miR-4433a-3p，人源miR-4433a-3p的成熟体核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种用于检测肺腺癌标记物miR-4433a-3p的引物组，其特征在于，所述引物组包括检测引物对和内参引物对，所述检测引物对的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述内参引物对的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

3.如权利要求2所述的引物组在制备检测肺腺癌结节的试剂盒中的应用。

4.如权利要求2所述的引物组在制备检测肺腺癌胸腔积液的试剂盒中的应用。

5.如权利要求2所述的引物组在制备检测肺腺癌术后评估的试剂盒中的应用。

6.一种用于非诊断和治疗目的的检测如权利要求1中所述的标记物miR-4433a-3p的方法，其特征在于，所述方法包括以下具体步骤：

S1、血液样本或胸腔积液样本收集及处理；

S2、采用trizol法提取总RNA；

S3、RNA定量及逆转录；

S4、miR-4433a-3p定量分析，包括定量实时qRT-PCR反应和数据分析。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述定量实时qRT-PCR法以U6为内参。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，miR-4433a-3p的PCR扩增体系总体积为20μL，包括PCR mix 10μL；引物0.4μL；ddH₂O 3μL；已稀的逆转录产物1μL。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述定量实时qRT-PCR的反应程序为预变性1次，95℃保持5min；循环反应40次，95℃保持10sec，60℃保持30sec；融解1次，95℃保持15sec，60℃保持60sec，95℃保持15sec。

10.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增体系中所述检测引物的终浓度为0.2μM，所述内参引物的终浓度为0.2μM。