[发明专利]一种多糖铁鉴别方法

权利要求书

1.一种多糖铁鉴别方法，包括如下步骤：

1)解络合，将多糖铁供试品溶于水中，加入磷酸盐解络合，沉淀，取上清液；

2)水解，取步骤1)中的上清液，用酸调节pH至酸性，加热进行水解，水解完成后，冷却，用碱调节pH至4-6，过滤，得到多糖酸溶液；

3)多糖铁中多糖末端基团检测，采用安捷伦高效液相色谱仪进行检测，以葡萄糖、对应多糖铁的多糖酸钠的混合溶液作为对照品，检测步骤2)水解溶液中的多糖酸与对照品中的多糖酸钠的相对保留时间是否一致，以确定多糖铁的多糖酸类别；

4)多糖铁中多糖的分子量测定，采用分子排阻法测定多糖分子量；取多糖铁，加入磷酸盐解络合至灰白色，取出放冷，纯化水稀释至刻度，过滤，取滤液进样检测。

2.根据权利要求1所述多糖铁鉴别方法，其特征在于：步骤1)解络合时水的加入量与供试品称量的比值为8-15ml/g。

3.根据权利要求2所述多糖铁鉴别方法，其特征在于：步骤1)中解络合时，所述磷酸盐为磷酸二氢钾及其结晶水合物。

4.根据权利要求3所述多糖铁鉴别方法，其特征在于：所述磷酸盐的加入量与供试品的质量比为0.005-0.08mol/g。

5.根据权利要求4所述多糖铁鉴别方法，其特征在于：解络合的温度为80℃以上。

6.根据权利要求1-5任一项所述多糖铁鉴别方法，其特征在于：步骤4)中解络合的磷酸盐为磷酸二氢钠或磷酸二氢钾，磷酸盐的加入量与供试品的质量比为0.005-0.08mol/g。

7.根据权利要求6所述多糖铁鉴别方法，其特征在于：水解步骤中，用酸调节pH1-2，水解温度控制在140-180℃，水解时间60-100min。

8.根据权利要求1所述多糖铁鉴别方法，其特征在于：高效液相色谱的条件为：采用XAmide色谱柱；10mmol/L的磷酸氢二钠—乙腈(20:80)为流动相，10mmol/L的磷酸氢二钠用磷酸调pH至2.8，流速1.0ml/min,柱温35℃；采用紫外检测器，检测波长为200nm。

9.根据权利要求8所述多糖铁鉴别方法，其特征在于，多糖铁中多糖的分子量测定包括如下步骤：

1)色谱条件

以亲水性球型高聚物为填充剂，选用Shodex OHpak色谱柱，以质量浓度为0.71％硫酸钠溶液为流动相，磷酸调节pH至4.5±0.3；柱温为30℃；流速为每分钟1.0ml；示差折光检测器温度为40℃；进样体积20μl；

2)供试溶液配制

将解络合完成后的反应液取出，放冷，纯化水稀释至刻度，过滤取滤液进样检测；

3)分子量对照品溶液：取5-6个葡萄糖分子量对照品，配成约5mg/ml，作为分子量对照品溶液。

4)标准曲线的建立

取分子量对照品溶液进样，记录色谱图，采用GPC软件绘制标准曲线，要求相关系数R不得小于0.998。

5)供试品分子量的测定

取供试品溶液进样检测，记录色谱图，以分子量标准曲线计算供试品重均分子量。