[发明专利]一种多糖铁鉴别方法

说明书

本发明公开了一种多糖铁鉴别方法，包括如下步骤：1)解络合，将多糖铁供试品溶于水中，加入磷酸盐解络合，沉淀，取上清液；2)水解，取步骤1)中的上清液，用酸调节pH至酸性，加热进行水解，水解完成后，冷却，用碱调节pH至4‑6，过滤，得到多糖酸溶液；3)多糖铁中多糖末端基团检测，采用安捷伦高效液相色谱仪进行检测，以葡萄糖、对应多糖铁的多糖酸钠的混合溶液作为对照品，检测步骤2)水解溶液中的多糖酸与对照品中的多糖酸钠的相对保留时间是否一致，以确定多糖铁的多糖酸类别；4)多糖铁中多糖的分子量测定。采用高效液相色谱法测定多糖铁中多糖的分子量和R基团，最终达到对多糖具体种类结构进行鉴别的目的。

技术领域

本发明涉及化合物分析技术领域，特别是一种多糖铁鉴别方法。

背景技术

合成多糖铁采用的多糖不同，可合成不同的多糖铁。多糖的差异分为分子量的差异和R基团的差异。关于多糖铁的鉴别，目前大多只对供试品进行铁鉴别和糖鉴别，其中糖鉴别仅仅是采用糖的化学反应鉴别供试品中是否含有糖，而未对糖的种类进行鉴别，所以无法达到区分不同多糖铁的目的。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，设计了一种多糖铁鉴别方法，采用高效液相色谱法测定多糖铁中多糖的分子量和R基团，最终达到对多糖具体种类结构进行鉴别的目的。

实现上述目的本发明的技术方案为：一种多糖铁鉴别方法，包括如下步骤：

1)解络合，将多糖铁供试品溶于水中，加入磷酸盐解络合，沉淀，取上清液；

2)水解，取步骤1)中的上清液，用酸调节pH至酸性，加热进行水解，水解完成后，冷却，用碱调节pH至4-6，过滤，得到多糖酸溶液；

3)多糖铁中多糖末端基团检测，采用安捷伦高效液相色谱仪进行检测，以葡萄糖、对应多糖铁的多糖酸钠的混合溶液作为对照品，检测步骤2)水解溶液中的多糖酸与对照品中的多糖酸钠的相对保留时间是否一致，以确定多糖铁的多糖酸类别；

4)多糖铁中多糖的分子量测定，采用分子排阻法测定多糖分子量；取多糖铁，加入磷酸盐解络合至灰白色，取出放冷，纯化水稀释至刻度，过滤，取滤液进样检测。

上述方案中：步骤1)解络合时水的加入量与供试品称量的比值为8-15ml/g。

上述方案中：步骤1)解络合时所述磷酸盐为磷酸二氢钾及其结晶水合物。

为区分不同的多糖铁，本发明采用高效液相色谱法检测多糖铁中多糖(多糖通式：Gn-R，其中G表示葡萄糖，n表示葡萄糖的数量，R表示多糖的末端连接基团)的分子量及多糖的R结构(R为-OCH₂(CHOH)₄CH₂OH(对应水解产物为葡萄糖)或-OCH₂(CHOH)_nCOOH(对应水解产物为多碳糖酸及其含盐化合物))，从而达到区别不同多糖铁目的。

多糖铁解络合溶液用于继续水解时，解络合采用的盐应采用磷酸二氢钾。在实验中，惊奇的发现在多糖铁用量一致的情况下，采用磷酸二氢钾解络合的溶液继续水解得到的多碳糖酸或多碳糖酸盐较使用磷酸二氢钠时的检测响应值高出许多。

上述方案中：所述磷酸盐的加入量与供试品的质量比为0.005-0.08mol/g。优选为0.014-0.018mol/g。

上述方案中：解络合的温度为80℃以上。

上述方案中：步骤4)中解络合的磷酸盐为磷酸二氢钠或磷酸二氢钾，磷酸盐的加入量与供试品的质量比为0.005-0.08mol/g。

上述方案中：水解步骤中，用酸调节pH1-2，水解温度控制在140-180℃，水解时间60-100min。