[发明专利]一种羊栖菜来源脂质纳米囊泡的制备方法及其产品与应用

说明书

本发明公开了一种羊栖菜来源脂质纳米囊泡的制备方法及其产品与应用，属于细胞生物学技术领域。通过差速离心、超速离心结合梯度密度离心的方式从羊栖菜中提取得到羊栖菜来源脂质纳米囊泡。所述羊栖菜来源脂质纳米囊泡可以减少LPS诱导的炎症细胞因子IL‑6、IL‑1β、TNF‑α的释放，并能将siRNA载入细胞，可应用于抗炎药物的制备，还可以作为药物载体，为抗炎药物及药物载体的开发提供了新的策略。

技术领域

本发明涉及细胞生物学技术领域，特别是涉及一种羊栖菜来源脂质纳米囊泡的制备方法及其产品与应用。

背景技术

炎症(inflammation)是具有血管系统的活体组织对损伤因子所产生的防御性反应。它包括致炎因子引起的损伤、机体防御性反应和组织损伤恢复三个方面。适度的炎症反应是机体保护自我的一种免疫反应，过度的炎症会导致机体的免疫损伤，诱发各种病症，如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、急性痛风性关节炎、动脉粥样硬化、糖尿病肾病等。患病机体的血液中检测到大量的炎症相关因子(如TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS和COX-2等)，这些因子浸润机体，引发各种不良反应，严重威胁到机体健康。因此预防和辅助治疗炎症显得尤为重要。

在炎症治疗和预防研究中，已经开发出许多抗炎药物，如肾上腺皮质激素类制剂、环磷酰胺、氨甲喋呤等，但治疗效果差强人意。因此，开发治疗炎症的新途径或新药物十分必要。

小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)是RNA干扰的引发物，激发与之互补的目标mRNA沉默，对基因调控及疾病治疗有重要意义。siRNA作为药物需要克服血管屏障、实现细胞内吞及溶酶体逃逸，同时还需要避免核酸酶作用下发生降解。因此，设计合适的载体以帮助siRNA成功递送进细胞并发挥作用是目前siRNA药物发展的重要目标。

综上所述，若是能开发一种既具有抗炎作用，能够用于制备抗炎药物，又能够作为siRNA的载体的物质，将具有十分广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种羊栖菜来源脂质纳米囊泡的制备方法及其产品与应用，以解决现有技术中存在的上述问题。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明的技术方案之一：一种羊栖菜来源脂质纳米囊泡的制备方法，包括以下步骤：

S1、打碎研磨：清洗羊栖菜，将清洗后的羊栖菜与PBS混合，进行打碎研磨；

S2、差速离心：将打碎研磨后的研磨液进行差速离心，得到差速离心后的上清液；

S3、超速离心：将差速离心后的上清液以4℃、100000-200000g超速离心60-120min，超速离心结束后弃上清，留沉淀；

S4、梯度密度离心：将步骤S3超速离心后的沉淀用PBS重悬，并轻加至浓度梯度从下往上依次为60wt.％、45wt.％、30wt.％、8wt.％的蔗糖梯度溶液最上层，然后以4℃，100000-200000g超速离心60-120min，离心完成后吸取8wt.％和30wt.％蔗糖层之间可见条带，重悬于PBS中，然后再次以4℃，100000-200000g离心60-120min，得到羊栖菜来源脂质纳米囊泡。

进一步地，步骤S1所述羊栖菜与PBS的质量比为1:5，所述打碎研磨共进行3-10次，每次1-5min，两次打碎研磨中间冷藏5-60min(研磨过程会产生热量)；所述打碎研磨的转速为15000-28000rpm，所述冷藏的温度为4℃。

进一步地，步骤S2所述差速离心的具体操作为：先以1000-2500g离心10-30min，弃沉淀，留上清，然后以3000-8000g离心10-30min，弃沉淀，留上清，最后以10000-30000g离心30-60min，弃沉淀，得到差速离心后的上清液。