[发明专利]一种分离检测N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸中手性杂质的方法

说明书

本发明提供一种分离检测N‑芴甲氧羰基‑O‑叔丁基‑L‑苏氨酰‑L‑苯丙氨酸中手性杂质的方法，包括：将手性杂质与N‑芴甲氧羰基‑O‑叔丁基‑L‑苏氨酰‑L‑苯丙氨酸于溶剂中共同溶解，得到澄清透明溶液；将澄清透明溶液作为HPLC的供试品溶液，通过HPLC方法将N‑芴甲氧羰基‑O‑叔丁基‑L‑苏氨酰‑L‑苯丙氨酸中的手性杂质进行分离检测；该检测包括：利用LUX‑1手性柱作为分离载体，将流动相A和流动相B在不同的时间采用不同的比例混合，以对供试品溶液进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述供试品溶液中各成分的种类以及每个成分对应的含量。该方法能够在短时间内将各成分进行有效分离，分离度达到1.5以上，检测结果准确可靠。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种分离检测N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸中手性杂质的方法。

背景技术

多肽产品，例如利拉鲁肽、索马鲁肽、贝那鲁肽，都可通过短肽N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸作为反应物料制备而成。若能够在短时间内检测出反应物料中的杂质情况，对于控制终产品多肽的质量至关重要。因此，需要对短肽中的杂质进行检测。

N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸作为一种多肽的反应物料，其常常会伴随一些手性杂质，而这些杂质，是由制备N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸的起始物料造成的。具体为：N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸的起始物料L-苏氨酸(H-L-Thr-OH)及L-苯丙氨酸(H-L-Phe-OH)中常常含有手性杂质D-苏氨酸(H-D-Thr-OH)和D-苯丙氨酸(H-D-Phe-OH)，导致生产出来的产品Fmoc-L-Thr(tBu)-L-Phe-OH中含有Fmoc-D-Thr(tBu)-L-Phe-OH,Fmoc-D-Thr(tBu)-D-Phe-OH,Fmoc-L-Thr(tBu)-D-Phe-OH这些手性异构体杂质。N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸检测的难度在于这3个手性杂质共存，它们化学性质相似，物理性质也相近，常规方法难以同时分离和定量分析，加之杂质含量相对较低，导致检出难度加大，准确测定含量更加困难。

对这种多个同分异构体的混合物的检测，现有技术采用的方式是对多个同分异构体分别单独进行分离检测，而这种检测方法会加大时间成本、检测成本，并且还会影响准确性。可是目前多肽等下游产业对Fmoc-L-Thr(tBu)-L-Phe-OH等保护氨基酸产品的质量要求很高(纯度≥99.5％，单杂≤0.1％等)，因此必需对产品中的相关杂质进行快速高效的分析，所以急需相应的分离检测方法。

发明内容

本发明的目的在于解决上述现有技术存在的缺陷，提供一种分离检测N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸中手性杂质的方法，该方法通过一次进样能够在较短时间内实现多成分有效分离并且定量检测。

一种分离检测N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸中手性杂质的方法，包括：

将手性杂质与N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸于溶剂中共同溶解，得到澄清透明溶液；

将所述澄清透明溶液作为HPLC的供试品溶液，以一定的检测手段进行检测，从而将所述N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸中的手性杂质进行分离检测；

所述一定的检测手段包括：利用LUX-1手性柱作为分离载体，通过高效液相色谱仪，将流动相A和流动相B在不同的时间采用不同的比例混合,以对所述供试品溶液进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述供试品溶液中各成分的种类以及每个成分对应的含量。

进一步地，如上所述的分离检测N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酰-L-苯丙氨酸中手性杂质的方法，所述将流动相A和流动相B以不同的时间对应不同的比例进行混合包括：