[发明专利]一种用于富集、扩增尿液eccDNA的试剂盒及方法和用途

权利要求书

1.一种用于富集和扩增尿液中eccDNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括DNA提取试剂、第一内参质粒、第二内参质粒、DNA纯化试剂、eccDNA富集试剂和eccDNA建库试剂。

2.根据权利要求1所述的用于富集和扩增尿液中eccDNA的试剂盒，其特征在于，所述第一内参质粒和第二内参质粒各自含有酶切识别位点，所述酶切识别位点包括Not I或Mss I酶切识别位点。

3.根据权利要求2所述的用于富集和扩增尿液中eccDNA的试剂盒，其特征在于，所述第一内参质粒和第二内参质粒选自P1035质粒或P895质粒。

4.根据权利要求3所述的用于富集和扩增尿液中eccDNA的试剂盒，其特征在于，所述DNA提取试剂包括低分子醇溶液。

5.根据权利要求3所述的用于富集和扩增尿液中eccDNA的试剂盒，其特征在于，所述DNA纯化试剂包括纯化磁珠。

6.根据权利要求3所述的用于富集和扩增尿液中eccDNA的试剂盒，其特征在于，所述eccDNA富集试剂包括核酸外切酶。

7.根据权利要求3所述的用于富集和扩增尿液中eccDNA的试剂盒，其特征在于，所述eccDNA建库试剂包括Tn5转座酶。

8.根据权利要求1-7任一项所述的用于富集和扩增尿液中eccDNA的试剂盒在以下任一种中的应用：

(1)制备富集和扩增尿液中eccDNA的产品；

(2)制备检测尿液中eccDNA的产品；

(3)制备开发或筛选肿瘤相关标志物的产品；

(4)制备肿瘤进展监测与评估的产品。

9.一种检测尿液中eccDNA的方法，其特征在于，包括使用权利要求1-7任一项所述的试剂盒富集和扩增尿液中eccDNA的步骤。

10.根据权利要求9所述的检测尿液中eccDNA的方法，其特征在于，包括：

1)提取尿液中的DNA样本，并在所述DNA样本中加入第一内参质粒和第二内参质粒，得到含有内参质粒的DNA样本，其中，所述第一内参质粒和所述第二内参质粒含有酶切识别位点；

2)消化含有第一内参质粒和第二内参质粒的DNA样本中的线性DNA，得到环状DNA；

3)纯化所述环状DNA；

4)扩增纯化后环状DNA，富集所述环状DNA，得到RCA扩增产物；

5)纯化所述RCA扩增产物，得到纯化后RCA扩增产物；

6)采用所述酶切识别位点对应的限制性内切酶对所述纯化后RCA扩增产物进行双酶切质控。