[发明专利]一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于：所述乙型肝炎E抗原检测试剂盒包括样本稀释液、包被磁珠、抗体标记、洗液、预激发液、激发液和标准品，

所述包被磁珠的表面结合有生物素标记的乙肝e抗体，

所述抗体标记为吖啶酯标记的乙肝e抗体，

所述预激发液为含双氧水的硝酸溶液，

所述激发液为氢氧化钠溶液。

2.根据权利要求1所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于，所述包被磁珠的制备方法包括以下步骤：

（a1）抗体透析：用第一PBS缓冲液将乙肝e抗体原料调整至所需的第一浓度，随后进行透析得第一e抗体溶液；

（a2）包被抗体：按比例将所述第一e抗体溶液与水溶性生物素进行混合、振荡反应，随后用第二PBS缓冲液进行透析得生物素标记e抗体溶液；

（a3）包被磁珠：将所述生物素标记e抗体溶液与SA磁珠进行混合、振荡反应，清洗后得包被磁珠。

3.根据权利要求1所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于，所述抗体标记的制备方法包括以下步骤：

（b1）抗体透析：用第三PBS缓冲液将乙肝e抗体原料调整至所需的第二浓度，随后进行透析得第二e抗体溶液；

（b2）标记抗体：按比例将所述第二e抗体溶液和吖啶酯进行混合、振荡反应得标记e抗体溶液；

（b3）纯化：将所述标记e抗体溶液用层析柱进行纯化得吖啶酯标记的乙肝e抗体。

4.根据权利要求1所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于：所述样本稀释液为Tris-HCl缓冲液且混合有吐温和防腐剂，所述洗液为Tris-HCl缓冲液且混合有吐温和防腐剂；所述吐温为选自吐温20、吐温40、吐温60和吐温80中的一种或多种组成的混合物，其浓度为0.1~1ml/L；所述防腐剂为选自叠氮钠、庆大霉素和硫柳汞中的一种或多种组成的混合物，其浓度为5~15ml/L。

5.根据权利要求1所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于：所述预激发液中双氧水的浓度为5~10ml/L，硝酸的浓度为5~10ml/L；所述激发液中氢氧化钠的浓度为5~10ml/L。

6.根据权利要求1所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于：所述乙型肝炎E抗原检测试剂盒还包括盒组件（1）和磁棒组件（2），所述盒组件（1）包括盛液单元以及形成在所述盛液单元任一侧面上的盒本体（10），所述盛液单元包括相互独立的至少一个稀释液盛槽（11）、磁珠盛槽（12）、稀释样本盛槽（13）、标记抗体盛槽（15）、至少一个洗液盛槽（16）和预激发液盛槽（18），所述磁棒组件（2）包括套管（21）以及可插入所述套管（21）内用于吸附磁珠的磁棒（22）。

7.根据权利要求6所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于：所述盒组件（1）还包括设置在所述稀释样本盛槽（13）和所述标记抗体盛槽（15）之间的第一空白槽（14）以及设置在所述洗液盛槽（16）和所述预激发液盛槽（18）之间的第二空白槽（17）。

8.权利要求1至7中任一所述乙型肝炎E抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）分别配制样本稀释液、洗液、预激发液和激发液；

（b）用指定浓度乙肝e抗原的冻干品作为标准品；

（c）将生物素标记的乙肝e抗体结合至磁珠的表面获得包被磁珠；

（d）利用吖啶酯标记乙肝e抗体获得抗体标记。

9.权利要求1至7中任一所述乙型肝炎E抗原检测试剂盒的应用，其特征在于，包括以下步骤：

（S1）将含乙型肝炎e抗原的待测样本加入样本稀释液中进行稀释得样本稀释溶液；

（S2）使所述样本稀释溶液与包被磁珠通过免疫反应结合，稀释后得磁珠e抗体溶液；

（S3）将所述磁珠e抗体溶液与抗体标记进行反应，洗涤后得磁珠e抗体/吖啶酯抗体复合物；

（S4）将所述磁珠e抗体/吖啶酯抗体复合物加入预激发液进行反应，随后加入激发液进行反应，并检测化学发光反应的发光值即可。

10.根据权利要求9所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒的应用，其特征在于，还包括以下步骤：（S5）利用校准品、定标卡对获得的所述发光值进行处理。