[发明专利]一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒，所述乙型肝炎E抗原检测试剂盒包括样本稀释液、包被磁珠、抗体标记、洗液、预激发液、激发液和标准品，所述包被磁珠的表面结合有生物素标记的乙肝e抗体，所述抗体标记为吖啶酯标记的乙肝e抗体，所述预激发液为含双氧水的硝酸溶液，所述激发液为氢氧化钠溶液。可实现快速检测乙肝e抗原，在保持良好性能的同时，大约10分钟便可获得结果检测结果。

技术领域

本发明属于检测试剂盒技术领域，涉及一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒，具体是一种基于吖啶酯化学发光法的乙型肝炎E抗原检测试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

我国的乙型肝炎病毒(HBV)携带者众多，对乙肝的诊断和检测长期以来都备受重视。对于乙型肝炎的检测，通常涉及五个项目，其中包括乙型肝炎病毒e抗原(简称乙肝e抗原，HBeAg)。乙肝e抗原通常与其他项目一起检测，是诊断乙肝大三阳(乙型肝炎病毒表面抗原阳性、乙型肝炎病毒e抗原阳性和乙型肝炎病毒核心抗体阳性)的重要指标之一，可有效反应乙肝患者体内病毒复制的活跃程度，是治疗阶段的重要参考指标。

目前常见的乙肝e抗原检测方法主要有酶联免疫法(Enzyme Immunoassay，EIA)、化学发光免疫分析法(Chemiluminesent Immunoassay，CLIA)和电化学发光(Electrogenerated Chemiluminescene，ECL)，这三种方法均是基于抗原抗体的免疫反应，使用不同的标记物和荧光检测方法得到相应的结果。其中，CLIA技术有着灵敏度高、线性范围广、更于实现自动化等特点而被广泛使用。

虽然化学发光免疫分析法(CLIA)目前得到普遍应用，但市面上仍主要使用基于板式CLIA的试剂盒。如申请号为200610030783.3的中国发明专利公开了一种检测血清中乙肝病毒核心抗原的酶联免疫测定试剂盒及其使用方法。该试剂盒的主要组分为：单克隆乙肝核心抗体预包被的微孔板、样本处理剂、辣根过氧化物酶标记的多克隆乙肝核心抗体。在使用时，将待检样本用样本处理剂预处理后，加到单克隆乙肝核心抗体预包被的微孔板中，加入酶标多克隆乙肝核心抗体，加入底物显色，再加终止液终止反应，最后比色测定结果。板式CLIA试剂盒仍采用酶促反应，以辣根酶或碱性磷酸酶交联抗体，检测动态发光，导致检测信号值衰减较快、高浓度和低浓度信号衰减不一致，限制了其在定量分析中低端检测的灵敏度、稳定性和重复性。

发明内容

针对上述现有技术存在的缺陷，本发明提供一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒。

为了达成上述目的，本发明提供一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒，所述乙型肝炎E抗原检测试剂盒包括样本稀释液、包被磁珠、抗体标记、洗液、预激发液、激发液和标准品，

所述包被磁珠的表面结合有生物素标记的乙肝e抗体，

所述抗体标记为吖啶酯标记的乙肝e抗体，

所述预激发液为含双氧水的硝酸溶液，

所述激发液为氢氧化钠溶液。

优化地，所述包被磁珠的制备方法包括以下步骤：

(a1)抗体透析：用第一PBS缓冲液将乙肝e抗体原料调整至所需的第一浓度，随后进行透析得第一e抗体溶液；

(a2)包被抗体：按比例将所述第一e抗体溶液与水溶性生物素进行混合、振荡反应，随后用第二PBS缓冲液进行透析得生物素标记e抗体溶液；

(a3)包被磁珠：将所述生物素标记e抗体溶液与SA磁珠进行混合、振荡反应，清洗后得包被磁珠。

优化地，所述抗体标记的制备方法包括以下步骤：

(b1)抗体透析：用第三PBS缓冲液将乙肝e抗体原料调整至所需的第二浓度，随后进行透析得第二e抗体溶液；