[发明专利]一株吩嗪-1-羧酸高产工程菌株的构建方法在审
| 申请号： | 202310326572.8 | 申请日： | 2023-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN116555142A | 公开（公告）日： | 2023-08-08 |
| 发明（设计）人： | 梁晓丽;曹宇飞;谭舒雅;刘开泉;赵彦;李玲;徐衍鹏;张淑玥;聂士昊;顾杰瑞 | 申请（专利权）人： | 齐鲁工业大学（山东省科学院） |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/31;C12N15/78;C12P17/12;C12R1/38 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 郑平 |
| 地址： | 250353 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 吩嗪 羧酸 高产 工程 菌株 构建 方法 | ||
1.一株吩嗪-1-羧酸高产工程菌株，其特征在于，所述工程菌株是敲除工程菌株QPCA-7基因组中GspC基因和/或Algb基因而得；
所述工程菌株QPCA-7是敲除绿针假单胞菌Qlu-1基因组中的phzO基因、lon基因、rsmE基因、psrA基因、parS基因、rpeA基因和pykF基因中的一个或多个而得；
所述绿针假单胞菌Qlu-1的保藏编号为CCTCC NO：M 2020108。
2.如权利要求1所述的吩嗪-1-羧酸高产工程菌株，其特征在于，所述GspC基因的序列如SEQ ID NO.1所示。
3.如权利要求1所述的吩嗪-1-羧酸高产工程菌株，其特征在于，所述Algb基因的序列如SEQ ID NO.7所示。
4.一株吩嗪-1-羧酸高产工程菌株的构建方法，其特征在于，包括：
敲除工程菌株QPCA-7基因组中GspC基因和/或Algb基因，即得。
5.如权利要求4所述的吩嗪-1-羧酸高产工程菌株的构建方法，其特征在于，敲除工程菌株QPCA-7基因组中GspC基因的具体步骤包括：
采用PCR钓取并连接GspC基因的上下游片段，得到GspC-ud片段；
将所述GspC-ud片段连接质粒pk18moBsacB构建GspC敲除质粒pK18-GspC-ud；
将所述GspC基因敲除质粒pK18-GspC-ud导入大肠杆菌S17-1(λ)，再与绿针假单胞菌QPCA-7进行双亲杂交培养，
筛选阳性克隆，即得敲除GspC基因的菌株QPCA-8。
6.如权利要求4所述的吩嗪-1-羧酸高产工程菌株的构建方法，其特征在于，GspC基因上下游融合片段的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。
7.如权利要求4所述的吩嗪-1-羧酸高产工程菌株的构建方法，其特征在于，GspC基因敲除引物包括：GspC-F1、GspC-R1、GspC-F2、GspC-R2，序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。
8.如权利要求4所述的吩嗪-1-羧酸高产工程菌株的构建方法，其特征在于，敲除工程菌株QPCA-7基因组中Algb基因的具体步骤包括：
采用PCR钓取并连接Algb基因的上下游片段，得到Algb-ud片段；
将所述Algb-ud片段连接质粒pk18moBsacB构建Algb基因敲除质粒pK18-Algb-ud；
将所述Algb敲除质粒pK18-Algb-ud导入大肠杆菌S17-1(λ)，再与绿针假单胞菌QPCA-7进行双亲杂交培养，
筛选阳性克隆，即得敲除Algb基因的菌株。
9.如权利要求4所述的吩嗪-1-羧酸高产工程菌株的构建方法，其特征在于，Algb基因上下游融合片段的碱基序列如SEQ ID NO.8所示。
10.如权利要求4所述的吩嗪-1-羧酸高产工程菌株的构建方法，其特征在于，Algb基因敲除引物包括：Algb-F1、Algb-R1、Algb-F2、Algb-R2，序列分别如SEQ ID NO.9、SEQ IDNO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12所示。
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