[发明专利]一种核酸检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种核酸检测试剂盒，其特征在于，所述核酸检测试剂盒包括修饰有供体荧光标记的核酸发夹探针A、修饰有受体荧光标记的核酸发夹探针B、引发链、Cas12a蛋白和crRNA；所述核酸发夹探针A和核酸发夹探针B能够在引发链的作用下发生杂交链式反应形成双链，并且，所述核酸发夹探针A和核酸发夹探针B形成双链后，供体荧光标记和受体荧光标记之间能够发生荧光共振能量转移，同时，供体荧光标记和受体荧光标记之间的距离为0～16个碱基；所述引发链能够在Cas12a蛋白的反式切割活性下发生裂解；所述Cas12a蛋白能够和crRNA结合形成靶向靶标核酸的二元复合物；所述供体荧光标记的发射波长能够作为受体荧光标记的激发波长。

2.如权利要求1所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述供体荧光标记包括羧基荧光素、Dabcyl或Cy3；所述受体荧光标记包括四甲基罗丹明、Glu或Cy5；所述核酸发夹探针A和核酸发夹探针B形成双链后，供体荧光标记和受体荧光标记之间的距离为2～5个碱基。

3.如权利要求1或2所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述核酸检测试剂盒还包括缓冲液。

4.如权利要求3所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括NEB缓冲液或PBS缓冲液。

5.一种核酸检测方法，其特征在于，所述方法为：使用权利要求1～4任一项所述的核酸检测试剂盒对待测样本进行检测，先将引发链、Cas12a蛋白、crRNA和待测样本混合，得到孵育体系；将孵育体系进行孵育，得到孵育液；将孵育液、核酸发夹探针A和核酸发夹探针B混合，得到反应体系；先将反应体系进行反应，得到反应液，再记录反应液在供体荧光标记的激发波长下的荧光光谱，接着计算反应液在供体荧光标记的发射波长和受体荧光标记的发射波长处的荧光强度变化，最后根据荧光强度变化和靶标核酸浓度之间的线性关系计算待测样本中靶标核酸的浓度。

6.如权利要求5所述的核酸检测方法，其特征在于，所述孵育体系中，引发链的浓度为10～400nM，Cas12a蛋白的浓度为50～500nM，crRNA的浓度为50～500nM。

7.如权利要求5或6所述的核酸检测方法，其特征在于，所述反应体系中，核酸发夹探针A的浓度为300～700nM，核酸发夹探针B的浓度为300～700nM。

8.如权利要求5～7任一项所述的核酸检测方法，其特征在于，所述孵育的温度为17～57℃、时间为0.5～4h。

9.如权利要求5～8任一项所述的核酸检测方法，其特征在于，所述反应的温度为27～37℃、时间为1～3h。

10.权利要求1～4任一项所述的核酸检测试剂盒或权利要求5～9任一项所述的核酸检测方法在核酸检测中的应用。