[发明专利]一种重组抗体纯化方法

权利要求书

1.一种重组抗体纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、对包含重组抗体的细胞培养上清进行亲和层析，收集亲和层析洗脱液；

S2、过滤所述亲和层析洗脱液，收集滤液；

S3、对所述滤液进行离子交换层析，所述离子交换层析依次包括阴离子层析柱和阳离子层析柱，收集离子层析洗脱液；

S4、对所述离子层析洗脱液进行透析处理，得到纯化后的重组抗体，其中，透析缓冲液由0.2-2mg/mL Poloxamer188、10-50mg/mL PEG3350和磷酸盐缓冲液组成。

2. 根据权利要求1所述的重组抗体纯化方法，其特征在于，所述透析缓冲液由0.2mg/mL Poloxamer188、10mg/mL PEG3350和磷酸盐缓冲液组成。

3.根据权利要求1所述的重组抗体纯化方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01M。

4. 根据权利要求1所述的重组抗体纯化方法，其特征在于，步骤S1中，所述亲和层析的层析柱为protein A层析柱。

5.根据权利要求4所述的重组抗体纯化方法，其特征在于，步骤S1中，所述亲和层析包括下述步骤：

S11、将细胞培养上清加载到平衡好的所述protein A层析柱上；

S12、用磷酸盐缓冲液淋洗所述protein A层析柱，所述磷酸盐缓冲液的pH为7.4；

S13、用由0.1M甘氨酸和150mM NaCl组成的亲和层析洗脱液淋洗所述protein A层析柱，所述亲和层析洗脱液的pH为2.2-4.0。

6. 根据权利要求1所述的重组抗体纯化方法，其特征在于，步骤S3中，所述阴离子层析柱为Diamond Q Mustang层析柱。

7. 根据权利要求1所述的重组抗体纯化方法，其特征在于，步骤S3中，所述阳离子层析柱为SP Bestarose BB层析柱。

8.根据权利要求1所述的重组抗体纯化方法，其特征在于，步骤S3中，所述阴离子层析柱和所述阳离子层析柱串联设置。

9.根据权利要求8所述的重组抗体纯化方法，其特征在于，步骤S3中，所述离子交换层析包括以下步骤：

S31、将所述滤液加载到串联好的所述阴离子层析柱和所述阳离子层析柱上，所述滤液的pH为5.5，电导≤5 mS/cm，上样流速为1mL/min；

S32、用50mM醋酸钠溶液淋洗所述阴离子层析柱和所述阳离子层析柱，直至电导基线趋于平衡，所述醋酸钠溶液的pH为5.5；

S33、拆下所述阴离子层析柱，之后采用200mM NaCl溶液对所述阳离子层析柱进行线性梯度洗脱，洗脱体积2-5CV，收集洗脱峰，直至电导基线趋于平衡，之后采用1M NaCl溶液对所述阳离子层析柱进行线性梯度洗脱，洗脱体积2CV，收集洗脱峰，直至电导基线趋于平衡，将电泳检测纯度高于95%的200mM、1M NaCl溶液洗脱的所述洗脱峰合并作为所述离子层析洗脱液。

10.根据权利要求1所述的重组抗体纯化方法，其特征在于，所述细胞培养上清中的细胞活率为70-90%。