[发明专利]一种重组抗体纯化方法

说明书

本发明属于抗体纯化技术领域，尤其涉及一种重组抗体纯化方法。所述方法包括：S1、对包含重组抗体的细胞培养上清进行亲和层析；S2、过滤；S3、进行离子交换层析，离子交换层析依次包括阴离子层析柱和阳离子层析柱；S4、进行透析处理，得到纯化后的重组抗体，其中，透析缓冲液包括：0.2‑2mg/mL Poloxamer188、10‑50mg/mL PEG3350和磷酸盐缓冲液。本发明的细胞培养上清依次经过亲和层析捕获富集抗体、阴离子层析分离核酸及核酸酶等杂质、阳离子层析进一步除杂处理，可收集得到纯度较高的离子层析洗脱液，最后通过透析处理，大大减少抗体聚集体的产生，且抗体纯度高。

技术领域

本发明涉及抗体纯化技术领域，特别涉及一种重组抗体纯化方法。

背景技术

随着生物医药行业的快速发展，蛋白质药物成为现代药物研发的重要方向之一，其中重组抗体类药物占据主要份额，需求日益庞大。抗体药物作为一种高剂量使用的生物制品，对其纯度以及杂质残留量有极高的要求，以保证其通过注射等给药方式直接进入体内的安全性和有效性，因此，需要严格的质量监管措施。如何快速获得抗体的纯化产品以及优化其生产工艺，成为药物研发公司关注的要点。

重组抗体药物在生产过程中，宿主核酸的残留引起可能带来的传染性或者致瘤的风险而被作为生物制品安全监管中的重要一项。世界卫生组织（World HealthOrganization，WHO）及世界各国对宿主核酸的残留都有严格的规定。因此，解决宿主核酸的残留是生物制品生产过程中必须面对的问题。核酸酶是一种可以降解核酸的酶，可将宿主核酸消化成3-8个碱基长度的5’-单磷酸寡核苷酸，且不具有碱基识别特异性。因此，在一些重组抗体药物的生产工艺中常使用核酸酶去除残留核酸，然而，在通过核酸酶处理生物制品的过程中，可能会引入微量核酸酶残留。由于核酸酶本身也属于外源性物质，这些微量残留会对后续生物制品的应用造成一定的影响，并可能会引起毒性或免疫反应。

目前多采用高温高压方式使酶失活，但灭活条件较为苛刻，且仅能使酶失活，不能有效控制和去除核酸酶。另有通过层析等方式如ProteinA层析柱来捕获抗体，并利用离子交换层析作为精纯步骤，但容易引入抗体大小变异体和电荷变异体，由于一些物理的和化学的因素，导致抗体聚集现象发生，聚集体不但会使病人产生免疫反应，甚至会使人对药物产生免疫耐受性，从而大大降低了药物的药效。除此之外，聚集体还会影响抗体药物的生物活性、稳定性以及保存期等，这些问题使得抗体药物聚集体的控制及其去除成为药物开发过程中的一大挑战。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种重组抗体纯化方法，以解决现有技术中重组抗体核酸残留以及抗体纯化过程中聚集体形成的技术问题。

本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种重组抗体纯化方法，包括以下步骤：

S1、对包含重组抗体的细胞培养上清进行亲和层析，收集亲和层析洗脱液；

S2、过滤所述亲和层析洗脱液，收集滤液；

S3、对所述滤液进行离子交换层析，所述离子交换层析依次包括阴离子层析柱和阳离子层析柱，收集离子层析洗脱液；

S4、对所述离子层析洗脱液进行透析处理，得到纯化后的重组抗体，其中，透析缓冲液包括：0.2-2mg/mL Poloxamer188、10-50mg/mL PEG3350和磷酸盐缓冲液。

进一步地，所述透析缓冲液包括：0.2mg/mL Poloxamer188、10mg/mL PEG3350和磷酸盐缓冲液。

进一步地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01M。

进一步地，步骤S1中，所述亲和层析的层析柱为protein A层析柱。

更进一步地，步骤S1中，所述亲和层析包括下述步骤：