[发明专利]一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应

权利要求书

1.一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应，其特征在于，包括以下过程：

S1、TRPML1激活；

S2、肿瘤细胞自噬下游受阻；

S3、线粒体更新障碍，受损线粒体大量累积；

S4、ROS水平升高；

S5、DNA受损，激活p53活性；

S6、触发肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞转移。

2.根据权利要求1所述的一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应，其特征在于：所述TRPML1为特异性存在于溶酶体膜上的非选择性阳离子通道。

3.根据权利要求1所述的一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应，其特征在于：所述肿瘤细胞选用人黑色素瘤细胞系(A-375)和人胶质母细胞瘤细胞系(U-87MG)。

4.根据权利要求1所述的一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应，其特征在于：所述TRPML1自噬活性调控采用的是TRPML1的特异性小分子激动剂ML-SA5和抑制剂ML-SI3。

5.根据权利要求1所述的一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应，其特征在于：实验方法如下：

H1、蛋白免疫印迹检测自噬小体标记蛋白LC3I I和自噬降解底物蛋白p62的表达变化，共聚焦显微镜检测自噬进程；

H2、采用Transwell migration实验和Transwell invasion实验分别用于监测肿瘤细胞的体外迁移和侵袭能力；

H3、运用台盼蓝染色实验检测肿瘤细胞的存活率，采用流式细胞术检测线粒体膜电位和细胞内ROS含量；蛋白免疫印迹、双荧光素酶报告基因实验分别检测p53蛋白表达水平和转录因子活性；QRT-PCR、蛋白免疫印迹分别检测转移相关基因MMPs和TWIST的mRNA和蛋白水平；明胶酶谱法检测MMP2和MMP9的酶活性；Migration实验和Invasion实验检测不同条件下肿瘤细胞体外转移特性的变化；

H4、构建黑色素瘤裸鼠转移模型，进行HE染色和小鼠活体成像检测人黑色素瘤在体转移情况，免疫组织化学染色检测肺转移瘤LC3和p62蛋白变化。