[发明专利]一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应

说明书

本发明涉及医药生物技术领域，具体公开了一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应，包括以下过程：S1、TRPML1激活；S2、肿瘤细胞自噬下游受阻；S3、线粒体更新障碍，受损线粒体大量累积；S4、ROS水平升高；S5、DNA受损，激活p53活性；S6、触发肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞转移，其中，肿瘤细胞选用人黑色素瘤细胞系A‑375和人胶质母细胞瘤细胞系U‑87MG，TRPML1自噬活性调控采用的是TRPML1的特异性小分子激动剂ML‑SA5和抑制剂ML‑SI3，通过以TRPML1为切入点，应用TRPML1的特异性小分子激动剂ML‑SA5调控自噬活性，发现TRPML1介导的自噬抑制可以抑制人黑色素瘤、神经胶质瘤在体外的迁移与侵袭，同时ML‑SA5作为TRPML1的特异性小分子激动剂可以有效地抑制在体实验中人黑色素瘤细胞向裸鼠肺脏的转移。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应。

背景技术

转移是恶性肿瘤的重要特征，也是导致肿瘤患者远期预后差以及病死率高的主要原因，自噬活动在肿瘤转移级联过程中的多方面参与调控肿瘤细胞的生物学行为，但是由于目前对自噬活动缺乏特异性的干预药物和干预方法，大大限制了有关自噬与肿瘤转移关系的研究，因此，寻找特异性调控自噬的药物或者干预手段，对于明确自噬与肿瘤转移的关系、阐述自噬调控肿瘤转移的分子机制尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种靶向TRPML1调控自噬的抗肿瘤效应，包括以下过程：

S1、TRPML1激活；

S2、肿瘤细胞自噬下游受阻；

S3、线粒体更新障碍，受损线粒体大量累积；

S4、ROS水平升高；

S5、DNA受损，激活p53活性；

S6、触发肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞转移。

优选的，所述TRPML1为特异性存在于溶酶体膜上的非选择性阳离子通道。

优选的，所述肿瘤细胞选用人黑色素瘤(A-375)和神经胶质瘤细胞(U-87MG)。

优选的，所述TRPML1自噬活性调控采用的是TRPML1的特异性小分子激动剂ML-SA5。

优选的，实验方法如下：

H1、蛋白免疫印迹检测自噬小体标记蛋白LC3II和自噬降解底物蛋白p62的表达变化，共聚焦显微镜检测自噬进程；

H2、采用Transwell migration实验和Transwell invasion实验分别用于监测肿瘤细胞的体外迁移和侵袭能力；

H3、运用台盼蓝染色实验检测肿瘤细胞的存活率，采用流式细胞术检测线粒体膜电位和细胞内ROS含量；蛋白免疫印迹、双荧光素酶报告基因实验分别检测p53蛋白表达水平和转录因子活性；QRT-PCR、蛋白免疫印迹分别检测转移相关基因MMPs和TWIST的mRNA和蛋白水平；明胶酶谱法检测MMP2和MMP9的酶活性；Migration实验和Invasion实验检测不同条件下肿瘤细胞体外转移特性的变化；

H4、构建黑色素瘤裸鼠转移模型，进行HE染色和小鼠活体成像检测人黑色素瘤在体转移情况，免疫组织化学染色检测肺转移瘤LC3和p62蛋白变化。

本发明的有益效果是：