[发明专利]一年生辣椒不同果实发育时期的内参基因及其引物和应用

权利要求书

1.一年生辣椒不同果实发育时期的内参基因，其特征在于，所述内参基因为CT8，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述的内参基因CT8在制备一年生辣椒不同果实发育时期检测试剂盒的应用。

3.权利要求1所述一年生辣椒不同果实发育时期的内参基因的特异性引物，其特征在于，所述内参基因CT8基因的特异性引物如SEQ ID NO.30和SEQ ID NO.31所示。

4.权利要求3所述的特异性引物在制备一年生辣椒不同果实发育时期检测试剂盒的应用。

5.一年生辣椒不同果实发育时期的内参基因的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)果实预处理：获取不同生长发育时期的一年生辣椒果实，研磨成粉末；

2)提取RNA：提取不同生长发育时期的辣椒果实粉末的RNA；

3)合成cDNA第一链；

4)筛选候选内参基因，设计引物；

所述候选内参基因包括GAPDH、UBI-3、UBI-1、ACT、EIF、β-TUB、α-TUB、CT1、CT2、CT3、CT4、CT5、CT6、CT7、CT8、CT9、CT10、CT11和CT12；

5)PCR扩增cDNA；

6)PCR扩增候选内参基因，使用软件计算引物扩增效率和斜率R²；

7)筛选内参基因：使用NormFinder、ΔCt、BestKeeper和geNorm四个软件分析候选内参基因稳定性，根据所获得的结果进行综合排序和评价，筛选出权利要求1所述的一年生辣椒果实发育的最适内参基因CT8。

6.根据权利要求5所述的一年生辣椒不同果实发育时期的内参基因的筛选方法，其特征在于，步骤4)所述候选内参基因的引物序列如SEQ ID NO.2～SEQ ID NO.39所示。