[发明专利]一种检测结节性硬化症基因突变的试剂盒在审
| 申请号： | 202310378161.3 | 申请日： | 2023-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN116287217A | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 刘可欣;葛毅媛;冯文华;陈燕兰;李婷;陈希文;赵爽 | 申请（专利权）人： | 广州凯普医药科技有限公司;南京凯普医学检验实验室有限公司;广东凯普生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6827;C12Q1/6837;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 吴波 |
| 地址： | 510700 广东省广州市黄埔区九*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 结节 硬化症 基因突变 试剂盒 | ||
1.一种检测结节性硬化症基因突变的试剂盒，其特征在于，包括固定有探针的基因芯片和标记的用于扩增基因突变位点的引物；
所述探针用于特异性结合包含基因突变位点的DNA片段和所述基因突变位点对应的正常位点的DNA片段；
所述基因突变位点包括TSC1基因的突变位点和TSC2基因的突变位点；
所述TSC1基因的突变位点包括c.1960C＞T、c.1907_1908del、c.1888_1891del、c.1680_1702del、c.1579C＞T、c.1525C＞T和c.1498C＞T；
所述TSC2基因的突变位点包括c.4174C＞T、c.4258_4261del和c.4375C＞T。
2.根据权利要求1所述检测结节性硬化症基因突变的试剂盒，其特征在于，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:20所示。
3.根据权利要求1所述检测结节性硬化症基因突变的试剂盒，其特征在于，所述基因芯片还固定一条标记的DNA序列；
所述DNA序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:21。
4.根据权利要求1～3中任意一项所述检测结节性硬化症基因突变的试剂盒，其特征在于，所述基因芯片的制备方法，包括以下步骤：
对所述探针的一端进行胺基化，将胺基化后的探针点样至活化处理的尼龙膜上进行共价结合反应，终止反应，得到基因芯片。
5.根据权利要求4所述检测结节性硬化症基因突变的试剂盒，其特征在于，所述尼龙膜的活化处理方法为将尼龙膜依次置于0.1MHCl水溶液、质量百分比20％的碳二亚胺溶液中浸泡，水洗干燥。
6.根据权利要求1所述检测结节性硬化症基因突变的试剂盒，其特征在于，扩增TSC1基因的突变位点的第一引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:22的正向引物和核苷酸序列如SEQID NO:23所示的反向引物；
扩增TSC2基因的突变位点的第二引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:24所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:25所示的反向引物。
7.根据权利要求1所述检测结节性硬化症基因突变的试剂盒，其特征在于，所述引物的标记物为生物素。
8.根据权利要求1～3和5～7中任意一项所述检测结节性硬化症基因突变的试剂盒，其特征在于，还包括PCR扩增用反应试剂和/或杂交反应用试剂。
9.根据权利要求8所述试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增用反应试剂包括10×PCRbuffer、dNTP、MgCl2和DNA聚合酶中的一种或几种。
10.根据权利要求8所述试剂盒，其特征在于，所述杂交反应用试剂包括杂交液、洗脱液、封阻液、链霉亲和素标记的酶溶液、显色液和洗涤液中的一种或几种。
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