[发明专利]一种检测结节性硬化症基因突变的试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测结节性硬化症基因突变的试剂盒，属于临床检测技术领域。该试剂盒包括固定有特异性结合基因突变位点和对应的正常位点的探针的基因芯片和标记的用于扩增基因突变位点的引物；TSC1基因的突变位点包括c.1960C＞T、c.1907_1908del、c.1888_1891del、c.1680_1702del、c.1579C＞T、c.1525C＞T和c.1498C＞T；TSC2基因的突变位点包括c.4174C＞T、c.4258_4261del和c.4375C＞T。该试剂盒操作简便，分辨率高且重复性好，可同时检出TSC1、TSC2基因突变位点的突变，极大提高检测特异性，降低成本。

技术领域

本发明属于临床检测技术领域，具体涉及一种检测结节性硬化症基因突变的试剂盒。

背景技术

结节性硬化症(tuberous sclerosis complex，TSC)是一种常见的神经皮肤综合征，也是一种常染色体显性遗传性疾病，新生儿发病率为1/6000～1/10000，成人约为1/8000。结节性硬化症可导致细胞增殖和分化失控，几乎累及所有器官和系统，尤以脑、皮肤、肾脏、心脏表现突出，病理改变是错构瘤。TSC1或TSC2是引起结节性硬化症的两个重要基因。TSC1位于9号染色体q34，包含23个外显子，编码由1164个氨基酸组成的错构瘤蛋白hamartin。TSC2位于16号染色体p13.3，编码由1807个氨基酸组成的结节蛋白Tuberin。Hamartin蛋白和Tuberin蛋白在高尔基体上形成异二聚体(heterodimer)，即形成Tuberin—Hamartin复合物并共同发挥功能，该复合物具有GTP激活蛋白(GAP)作用，在P13K/AKT信号转导通路和Ras/有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号转导通路调控下，负向调节下游Rheb蛋白，抑制mTOR蛋白介导的信号转导，对细胞代谢、增殖和细胞骨架运动发挥重要调节作用，并有抗肿瘤作用。TSC基因突变导致mTOR信号转导通路异常激活，mTORCl蛋白活性增强，促进下游S6K1蛋白和4E-BP蛋白磷酸化，并负反馈抑制上游AKT蛋白激活，同时，TSC蛋白功能缺失亦抑制mTORC2蛋白介导的AKT蛋白激活，二者共同作用导致蛋白合成和细胞增殖增加，从而出现错构瘤等病理改变。

约2/3的结节性硬化症系散发性TSC基因变异所致，其中TSC2基因突变率约为TSC1基因的3倍；约1/3的结节性硬化症呈常染色体显性遗传，家系中以TSC1基因突变较为常见。2012年6月第二届国际TSC共识会议对该病的诊断标准进行了更新。其中的基因诊断标准为：只要证实存在TSC1或TSC2的致病性突变，即可明确诊断本病，但10％～25％的TSC患者TSC1或TSC2突变检测阴性，故基因检测阴性不足以排除TSC诊断，其临床特点仍是TSC的诊断条件。同时也强调，如果诊断结果为其他类型的突变，且未证实为致病性，不能确定其影响TSC1/2复合体的功能，则不能作为明确诊断TSC的标准。尽管有明确的临床诊断标准，但在实际应用中仍具有一定困难。对于年轻患者，尚缺乏典型的临床症状，或者具有严重的临床症状但缺乏特异性。TSC嵌合型较多，先证者的父母有可能是患者，也可能没有任何TSC相关的症状，基因检测可以帮助确定致病基因来源，有助于患病家系进行遗传咨询和产前诊断，对降低出生缺陷具有重要意义，因此基因检测仍然是TSC诊断的首选方法。经查询HGMD数据库，截止2016年4月共发现1206例致病突变，黄国强等人对国内163例发生TSC基因突变的患者的基因突变和临床表型进行了综合分析得出TSC1基因主要于第15、21、l8号外显子上发生突变，TSC2基因主要于第37、40、34号外显子上发生突变。