[发明专利]一种采用LC-MS检测低分子肝素中寡糖含量的方法及应用

权利要求书

1.一种分离低分子肝素中寡糖的方法，其特征在于，包括：使用液相色谱，采用梯度洗脱进行分离，梯度洗脱的程序包括：

0min，流动相A体积：流动相B体积为10：90；

40min，流动相A体积：流动相B体积为35：65；

50min，流动相A体积：流动相B体积为50：50；

60min，流动相A体积：流动相B体积为50：50；

60.01min，流动相A体积：流动相B体积为90：10；

70min，流动相A体积：流动相B体积为90：10；

70.01min，流动相A体积：流动相B体积为10：90；

100min，流动相A体积：流动相B体积为10：90；

流动相A为乙酸铵水溶液，流动相B为乙酸铵乙腈溶液。

2.根据权利要求1所述的分离低分子肝素中寡糖的方法，其特征在于，低分子肝素为依诺肝素钠。

3.根据权利要求1所述的分离低分子肝素中寡糖的方法，其特征在于，液相色谱条件包括以下中的一种或多种：(a)色谱柱选择3μm HILIC150*2mm；(b)检测器选择UV234nm；(c)柱温选择22℃；(d)流速选择0.15mL/min；(e)进样量选择3μl。

4.一种采用LC-MS检测低分子肝素中寡糖含量的方法，其特征在于，包括：(1)使用权利要求1至3中任一项权利要求所述的分离低分子肝素中寡糖的方法分离低分子肝素进样样品；(2)进入质谱检测器进行检测；(3)自动分析质谱数据库，通过质荷比和保留时间对分析组分进行匹配归属，对归属后的寡糖响应值进行归一化处理，得到各寡糖的百分比含量。

5.根据权利要求4所述的采用LC-MS检测低分子肝素中寡糖含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，低分子肝素进样样品的浓度为5mg/mL。

6.根据权利要求4或5所述的采用LC-MS检测低分子肝素中寡糖含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，低分子肝素进样样品使用流动相A和流动相B的混合流动相进行溶解，流动相A为乙酸铵水溶液，流动相B为乙酸铵乙腈溶液。

7.根据权利要求4或5所述的采用LC-MS检测低分子肝素中寡糖含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，质谱检测器选择四极杆-飞行时间串联质谱检测器。

8.根据权利要求4或5所述的采用LC-MS检测低分子肝素中寡糖含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，质谱检测条件包括以下条件中的一种或多种：(a)毛细管电压2.50kV；(b)锥孔电压40V；(c)离子源温度为120℃；(d)脱溶剂气温度为500℃。

9.根据权利要求7所述的采用LC-MS检测低分子肝素中寡糖含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，质谱检测条件包括以下条件中的一种或多种：(a)毛细管电压2.50kV；(b)锥孔电压40V；(c)离子源温度为120℃；(d)脱溶剂气温度为500℃。

10.根据权利要求4、5或9所述的采用LC-MS检测低分子肝素中寡糖含量的方法，其特征在于，步骤(3)中，选择UNIFI软件进行分析。