[发明专利]一种UBE3B突变基因、检测试剂盒、方法

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种UBE3B突变基因、检测试剂盒、方法；本方法包括取胎儿羊水样本及其父母的血液样本，进行DNA提取；设计UBE3B:c.1283‑6TG和UBE3B:c.649_653del位点的引物；进行PCR扩增；将PCR扩增后的产物进行纯化，再进行Sanger测序，判断UBE3B:c.1283‑6TG和UBE3B:c.649_653del位点是否发生变异，2个变异是否分别遗传自父母一方；本发明通过设计引物，对UBE3B:c.1283‑6TG和UBE3B:c.649_653del位点进行突变检测，通过对胎儿羊水样本及其父母进行基因检测，判断胎儿患Kaufman眼脑面综合征的几率，实现对胎儿患Kaufman眼脑面综合征的产前诊断。

技术领域

本发明属于医学诊断试剂技术领域，具体涉及一种UBE3B突变基因、检测试剂盒、方法。

背景技术

Kaufman眼脑面综合征（Kaufman Oculo-cerebro-facial Syndrome，KOS）是一种罕见的遗传性疾病，Kaufman眼脑面综合征呈常染色体隐性遗传，是一种影响机体多系统的遗传性疾病。临床特征主要表现为：严重的智力障碍、发育迟缓、小头畸形、小颌畸形、肌张力减退、上睑下垂、内眦赘皮、斜视、耳廓畸形、听力损失、肾脏和外生殖器发育畸形等，可伴有低促肾上腺皮质激素水平和胆固醇水平异常等。脑部MRI可见胼胝体发育不全或未发育。Kaufman眼脑面综合征具有高度异质性的临床表型，与Goldenhar综合征、Coffin-Siris 综合征等疾病具有表型的重叠性，仅通过临床表型很难鉴别诊断。

目前Kaufman眼脑面综合征的诊断建立在具有发育迟缓/智力残疾和双等位基因UBE3B致病变异的先证者中，UBE3B致病性变异的杂合子，则患者的每个未出生的弟妹在受孕时有25%的可能会患病，有 50%的机会成为无症状携带者，并将致病基因继续遗传下去，并且有25%的机会不遗传任父亲和母亲致病变异。一旦在患病的家庭成员中鉴定出UBE3B致病性变异，就可以对有风险的亲属进行携带者基因检测，对高风险妊娠进行产前检测，以及进行植入前基因检测。 UBE3B编码蛋白质泛素-蛋白质连接酶E3B，一种线粒体相关蛋白，包含一个N端IQ结构域和一个C端HECT结构域。该蛋白质较长同工型的C末端HECT结构域可能是泛素转移的催化位点，并与E2结合酶形成复合物。这种蛋白质的较短同种型缺乏C末端HECT结构域，如果产生，不太可能与E2酶相互作用。

UBE3B在中枢神经系统、消化道和呼吸系统以及皮肤和其他软组织的多个细胞谱系中高度表达。在大脑中，UBE3B与突触后密度分数相关，并以细胞自主方式调节树突分支[ Ambrozkiewicz et al 2020 ]。

在患有Kaufman眼脑面综合征的个体中发现的UBE3B致病变异是HECT结构域高度保守的氨基酸残基中的错义替换，或预计会导致无义介导的mRNA衰变和/或蛋白质截短的移码和无义变异。这些变体可能会抑制所有E3连接酶活性[ Basel-Vanagaite et al 2012, Basel-Vanagaite et al 2014 , Ambrozkiewicz et al 2020 ]。

UBE3B有五种转录变体：两种编码更长的转录本（NM_130466.3、 NM_183415.2），包含28 个外显子并编码1,068个氨基酸的蛋白质亚型（~123 kd）；三个编码较短的转录变体（NM_001270449.1、NM_001270451.1、NM_001270450.1），它们包含九个外显子，预计编码一个244个氨基酸的蛋白质。

但目前国内尚没有关于检测UBE3B基因突变，作为在产前诊断Kaufman眼脑面综合征携带者标准的案例报道，更没有相应的产前检测手段。

发明内容