[发明专利]一种中药复方UPLC指纹图谱的建立、指纹图谱及应用

权利要求书

1.一种中药复方UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备

按照甘草泻心汤处方药材，取甘草20g，黄芩15g，干姜15g，大枣12g，半夏13g，黄连5g，称取16批次，采用半仿生提取法提取样品母液，取样品母液20mL，加入乙酸乙酯溶剂20mL，通过萃取瓶振摇5min，静置10min，取下层溶液经连续3次萃取，合并3次萃取液，萃取液在55℃下旋转蒸干，用质量分数为50％的甲醇溶液定容至20mL，得到水溶性部位样品溶液，用0.45μm滤膜滤过，得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备

选择甘草苷，黄芩苷，汉黄芩苷，盐酸黄连碱，甘草素，甘草酸铵，盐酸小檗碱混合后，以甲醇溶解至浓度为1.0mg/mL，作为对照品溶液；

(3)UPLC色谱条件

色谱柱Shim-pack Scepter C18-200(3μm，4.6×250mm)，梯度洗脱：流动相A为体积分数为0.4％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈，0～5min，流动相B的体积百分含量从2％升至6％；5～10min，流动相B的体积百分含量从6％升至8％；10～15min，流动相B的体积百分含量从8％升至15％；15～20min，流动相B的体积百分含量从15％升至20％；20～30min，流动相B的体积百分含量从20％升至23％；30～40min，流动相B的体积百分含量从23％升至32％；40～60min，流动相B的体积百分含量从32％升至35％；60～80min，流动相B的体积百分含量从35％升至50％；80～85min，流动相B的体积百分含量从50％升至80％；85～90min，流动相B的体积百分含量从80％升至98％；90～95min，流动相B的体积百分含量从98％降至60％；95～100min，流动相B的体积百分含量从60％降至35％；100～105min，流动相B的体积百分含量从35％降至2％；

(4)UPLC指纹图谱的建立

按色谱条件进样，记录UPLC数据(CDF格式数据)，将原始数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件中，以多点校正法进行共有峰匹配，建立指纹图谱；以S9为参考图谱，对照谱图生成方法为中位数法，时间窗宽度0.5，图谱间距400，得到16批水溶性部位样品指纹图谱。

2.如权利要求1所述的一种中药复方UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤(1)中提取样品母液具体是进行三次煎水，具体提取条件为：第一次煎水pH＝4.0、煎煮1.0h，第二次煎水pH＝7.0、煎煮0.5h，第三次煎水pH＝8.0、煎煮0.5h，、煎水液料比1:10，提取温度为95℃下回流提取，各PH值采用0.1mol·L^-1的HCl和0.1mol·L^-1的NaOH进行调节。

3.如权利要求1或2所述的一种中药复方UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤(3)UPLC色谱条件中检测波长277nm，流速0.3mL·min^-1，进样量3μL，柱温15℃。

4.如权利要求3所述的方法建立的中药复方UPLC指纹图谱，其特征在于：对水溶性部位样品进行质谱解析，步骤(4)建立的甘草泻心汤水溶性部位UPLC指纹图谱，具有46个共有峰中解析出23个化合物成分，并对这23个化合物进行种类归属，发现主要是酮类、酸类、苷类、黄酮类、生物碱类成分，其中11、12、17、18、34、36、38、40共有峰归属于甘草，19、23、24、28、29、32、36、39归属于黄芩，22、30、35归属于黄连，15归属于半夏，5、21、31归属于大枣，其中4号峰为苯丙氨酸、5号峰为腺苷、6号峰为甘草内酯、8号峰为5,7-二羟基-6-甲氧基黄酮-7-O-葡萄糖醛酸苷、10号峰为蔗糖、11号峰为刺芒柄花苷、12号峰为甘草素-4'-O-β-D-葡萄糖-(1→6)-O-β-D-葡萄糖苷、17号峰为甘草苷、21号峰为环磷酸腺苷、22号峰为盐酸巴马汀、23号峰为5,7,8-三羟基黄酮-7O-葡萄糖苷、24号峰为黄芩苷、25号峰为木兰花碱、28号峰为、去甲汉黄芩素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、29号峰为野黄芩苷、30号峰为黄连碱、31号峰为无刺枣苄苷、32号峰为汉黄芩苷、35号峰为小檗碱、36号峰为甘草素、38号峰为乌拉尔甘草皂苷P、40号峰为甘草酸铵。