[发明专利]一种头孢硫脒及其制剂中的聚合物杂质的HPLC检测方法

说明书

本发明公开了一种头孢硫脒及其制剂中的聚合物杂质的HPLC检测方法，包括步骤：使用高效液相色谱法（HPLC）对头孢硫脒及其制剂中的聚合物杂质进行分离测定，其中聚合物杂质为头孢硫脒与7‑ACA、头孢硫脒β‑内酰胺环水解物以及头孢硫脒β‑内酰胺环水解脱羧物形成的二聚体、三聚体和多聚体，该方法以球状亲水硅胶为填充剂，并以缓冲盐‑有机相溶液作为流动相，色谱柱柱温为30‑40℃。该方法具有分离度好、简单快速、专属性强、灵敏度高、再现性好，能够对头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质在更好分离的前提下得到更准确的含量测定。

技术领域

本发明涉及色谱法测试或分析技术领域，具体来说，涉及头孢硫脒及其制剂中的聚合物杂质的HPLC检测方法。

背景技术

头孢硫脒系第一代头孢菌素，其对革兰阳性菌及部分革兰阴性菌均有抗菌活性，对革兰阳性球菌的作用尤强。临床上主要用于敏感菌所引起呼吸系统、肝胆系统、五官、尿路感染及心内膜炎、败血症。本品通过抑制敏感菌的细胞壁合成产生作用，主要作用于细菌的中隔细胞壁，抑制细菌粘肽合成第三步，阻止粘肽的交叉联结，使完整的细胞壁无法形成，而产生杀菌作用；是一种繁殖期杀菌剂。

头孢硫脒化学结构如下所示：

中国药典2020版中对头孢硫脒钠盐的质量控制包括酸碱度、澄清度与颜色、有关物质(杂质C、杂质D峰等)、残留溶剂、细菌内毒素等。

其中对头孢硫脒聚合物的有关物质的质量控制检测按照HPLC法(中国药典通则0512)测定。色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil100-5C18，4.6mmx250mm，5μm或效能相当的色谱柱)；以磷酸盐缓冲液(取无水磷酸氢二钠2.76g，枸橼酸1.29g，加水溶解并稀释成1000ml)-乙腈(86:14)为流动相；检测波长为254nm；进样体积10μl。具体测定方法为：精密量取供试品溶液、对照溶液与杂质C对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。

质量控制限度为：杂质C峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.1倍(0.1％)，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5％)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍(1.5％)，小于灵敏度溶液主峰面积0.5倍的峰忽略不计。

抗生素中的高分子杂质，统称为聚合物。大量研究表明引发头孢菌素过敏反应的过敏原是制剂中高分子聚合物杂质，通过控制聚合物杂质可控制过敏反应的发生。因此，头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的含量水平的高低直接决定了产品的质量及后续临床用药的安全。但是，现行的头孢硫脒及其制剂的国内外现行药典质量标准均未对其聚合物杂质进行控制，仅对笼统的有关物质进行质控，无法具体分离确定聚合物杂质的含量。

中国专利申请CN104910186A公开了一种头孢硫脒水合物晶型。该专利披露该晶型稳定性较好，初始点聚合物杂质含量低，且不随着贮存时间的延长而明显明显。该专利文献也披露头孢硫脒国家药品标准未将头孢硫脒高分子聚合物列为检定项目，国内的药学研究也主要集中在头孢硫脒的合成与纯化，头孢硫脒及其制剂的纯度、含量及相关杂质测定，以及其降解产物的检测等方面；大多从提高含量、降低杂质等方面来提高其稳定性，在聚合物含量的考察中其结果并不理想。该专利文献披露的聚合物含量测定方法参照“高效分子排阻色谱法测定头孢硫脒聚合物含量”一文(晏会根，高效分子排阻色谱法测定头孢硫脒聚合物含量(J)，海峡药学，2010，22(3)：62-64)。该方法具体为采用TSKgel G2000SWxl，规格为7.8mm×30cm，5μm色谱柱，以0.01mol/L醋酸钠溶液：乙腈(93:7)为流动相，流速0.5ml/min，检测波长为254nm；文献披露是在0.4-2.0mg/ml范围内供试品溶液浓度与峰面积的线性相关系数r为0.9989。

但是本发明人团队重现上述聚合物检测方法发现，该专利文献披露的分析方法供试品溶液浓度与峰面积的线性相关系数r相比本发明的方法较低，这可能是由于其分离度不够导致(文献未披露，本发明人团队的重复结果为3.4)。