[发明专利]一种黄鳍鲷脾脏细胞系及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种黄鳍鲷脾脏细胞系，其于2023年3月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C202352。

2.一种如权利要求1所述的黄鳍鲷脾脏细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1、将鱼脾脏组织依次置于乙醇溶液和PBS溶液中浸泡，然后剪成小于2mm³的组织块；

步骤S2、将所述组织块置于第一培养基中培养，得到原代脾脏细胞，待所述原代脾脏细胞培养至密度为70％～80％后，去除所述第一培养基，然后加入消化液进行消化，固液分离，并收集细胞沉淀，得到传代黄鳍鲷脾脏细胞系，并用第一培养基进行传代培养；

步骤S3、传代培养至第8～10代，用第二培养基进行培养，传代培养至第18～20代，用第三培养基进行培养，即得所述黄鳍鲷脾脏细胞系。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述消化液中蛋白酶体积分数为0.2％～0.3％。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述第一培养基为含有青霉素、链霉素、硫酸软骨素、bFGF、IGF-1和胎牛血清的DMEM/F-12培养基，其中所述胎牛血清的体积分数为18％～22％。

5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述第二培养基为含有青霉素、链霉素、硫酸软骨素、bFGF、IGF-1和胎牛血清的DMEM/F-12培养基，其中所述胎牛血清的体积分数为8％～12％。

6.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述第三培养基为含有8％～10％胎牛血清的DMEM/F-12培养基。

7.根据权利要求4～6任一项所述的构建方法，其特征在于，所述DMEM/F-12培养基中DMEM培养基与F-12培养基的体积比为1：0.8～1.2。

8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述培养的温度为28±2℃，CO₂的体积分数为4％～6％。

9.一种如权利要求1所述的黄鳍鲷脾脏细胞系在(1)～(3)中任一项中的应用；

(1)培养鳜蛙病毒；

(2)非诊断治疗目的地检测鳜蛙病毒；

(3)用于黄鳍鲷基因功能研究。

10.一种如权利要求1所述的黄鳍鲷脾脏细胞系在制备鳜蛙病毒疫苗中的应用。