[发明专利]一种黄鳍鲷脾脏细胞系及其构建方法与应用

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种黄鳍鲷脾脏细胞系及其构建方法与应用。该黄鳍鲷脾脏细胞系于2023年3月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C202352，目前已传至第40代，该细胞系生长迅速，细胞活力高，传代后可在数天内完成实验要求所需的细胞密度，其攻毒试验结果显示，该黄鳍鲷脾脏细胞系对鳜蛙病毒具有优异的敏感性，可以作为病毒扩繁和功能研究的细胞材料。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种黄鳍鲷脾脏细胞系及其构建方法与应用。

背景技术

黄鳍鲷(Acanthopagrus latus)，俗称黄脚立，属鲈形目，鲷科，棘鲷属鱼类，在中国广东省沿岸分布较为普遍，为广东珠海的经济海水鱼类，也是我国重要的经济鱼类之一。作为一种浅海暖水性底层鱼类，黄鳍鲷能够适应盐度的剧变，可以在不同的盐度水体中正常生长。随着黄鳍鲷养殖业的发展迅速，细菌性和病毒性等疾病也频繁爆发，造成了养殖业上严重的经济损失，给黄鳍鲷产业发展带来了挑战与阻碍。

相关技术中，开展活体实验细胞系是用于研究鱼类免疫学和毒理学的有力工具，也是用于相关病毒分离鉴定、疫苗研制的必要材料。鱼类原代细胞系的建立技术已经逐渐成熟，但对于不同物种乃至不同的组织，其细胞分离方法、培养条件均有差异，需要不断地摸索与修正。目前，建立的黄鳍鲷细胞系较少，黄鳍鲷脾脏细胞系建立目前还未见报道。

因此，有必要建立一种黄鳍鲷脾脏细胞系及其构建方法，为黄鳍鲷病毒病与基因功能的研究提供良好的实验材料。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出了一种黄鳍鲷脾脏细胞系及其构建方法与应用，该黄鳍鲷脾脏细胞系生长迅速，细胞活力高，传代后可在数天内完成实验要求所需的细胞密度，且对鳜蛙病毒具有优异的敏感性。

本发明还提出了一种黄鳍鲷脾脏细胞系的构建方法。

本发明还提出了一种黄鳍鲷脾脏细胞系在(1)～(3)中任一项中的应用；

(1)培养鳜蛙病毒；

(2)非诊断治疗目的地检测鳜蛙病毒；

(3)用于黄鳍鲷基因功能研究。

本发明还提出了一种黄鳍鲷脾脏细胞系在制备鳜蛙病毒疫苗中的应用。

本发明的第一方面，提供了一种黄鳍鲷脾脏细胞系，其于2023年3月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202352。

根据本发明实施例的黄鳍鲷脾脏细胞系，至少具有如下有益效果：本发明的黄鳍鲷脾脏细胞系生长迅速，细胞活力高，传代后可在数天内完成实验要求所需的细胞密度，且对鳜蛙病毒具有优异的敏感性，相对于常规途径获得的黄鳍鲷脾脏细胞系效果更佳。

本发明的第二方面，提供了一种黄鳍鲷脾脏细胞系的构建方法，包括以下步骤：

步骤S1、将鱼脾脏组织依次置于乙醇溶液和PBS溶液中浸泡，然后剪成小于2mm³的组织块；

步骤S2、将所述组织块置于第一培养基中培养，得到原代脾脏细胞，待所述原代脾脏细胞培养至密度为70％～80％后，去除所述第一培养基，然后加入消化液进行消化，固液分离，并收集细胞沉淀，得到传代黄鳍鲷脾脏细胞系，并用第一培养基进行传代培养；

步骤S3、传代培养至第8～10代，用第二培养基进行培养，传代培养至第18～20代，用第三培养基进行培养，即得所述黄鳍鲷脾脏细胞系。

根据本发明实施例的构建方法，至少具有如下有益效果：本发明的黄鳍鲷脾脏细胞系构建方法简单，通过逐步驯化过程获得的黄鳍鲷脾脏细胞系对鳜蛙病毒具有优异的敏感性。