[发明专利]一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系

权利要求书

1.一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系，其包含两种构建体，分别是表达载体和辅助载体，其中表达载体为插入辛德比斯病毒(SIN)包装信号(PS)的塞姆利基森林病毒(SFV)表达载体，辅助载体则表达辛德比斯病毒的结构基因。

2.如权利要求1所述一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系，其中所述表达载体按5’-3’方向包含：

(1)塞姆利基森林病毒的5’UTR序列，包含5’帽结构(SEQ ID NO.1)；

(2)编码塞姆利基森林病毒RNA聚合酶的一种或多种核苷酸序列；

(3)辛德比斯病毒包装信号序列；

(4)多克隆位点和/或目的基因或异源核苷酸序列；

(5)辛德比斯病毒的3’UTR(SEQ ID NO.2)；

(6)保证RNA稳定性的3’polyA。

3.如权利要求2所述的一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系，其中所述目的基因位于所述RNA聚合酶编码单元的下游或上游。目的蛋白编码单元上游和下游都存在驱动依赖于所述RNA聚合酶之复制的复制启动元件，从而实现所述目的蛋白编码单元的复制。目的蛋白和RNA聚合酶作为融合蛋白表达，所述融合蛋白中目的蛋白和RNA聚合酶之间存在连接序列，所述连接序列包含编码蛋白酶识别位点的区段，在所述融合蛋白经蛋白酶识别并切割后提供所述RNA聚合酶，优选地，所述蛋白酶识别位点为2A肽序列。

4.如权利要求2或3所述的一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系，其中所述辛德比斯病毒包装信号序列位于所述RNA聚合酶编码单元的上游、中间或下游；其中辛德比斯病毒的3’UTR可以替换为其它甲病毒的3’UTR。

5.如权利要求1所述嵌合病毒样颗粒的制备体系，其中所述辅助载体按5’-3’方向包含：

(1)塞姆利基森林病毒的5’UTR序列，包含5’帽结构；

(2)塞姆利基森林病毒的保守序列元件CSE2(SEQ ID NO.3)；

(3)塞姆利基森林病毒的亚基因组启动子SGP(SEQ ID NO.4)；

(4)辛德比斯病毒的衣壳蛋白或糖蛋白；

(5)塞姆利基森林病毒的3’UTR(SEQ ID NO.5)；

(6)保证RNA稳定性的3’polyA。

6.如权利要求5所述的一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系，其中所述辛德比斯病毒的衣壳蛋白或糖蛋白，可以在同一个载体或者分开两个载体；其中所述目的蛋白编码单元位于所述塞姆利基森林病毒的保守序列元件的下游或上游。

7.如权利要求1-6任一项所述的一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系，其是DNA或RNA，其是线性的或环状的；优选为RNA，包括单链RNA或双链RNA，例如是单链RNA，特别地所述单链RNA是正链(+)。

8.如权利要求1至7任一项所述的一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系，其中所述RNA聚合酶是病毒复制酶，特别地所述病毒复制酶为甲病毒的复制酶，

优选地，所述甲病毒选自塞姆利基森林病毒(SEQ ID NO.6)、巴马森林病毒、基孔肯尼雅病毒、欧尼恩病毒、罗斯河病毒、贝巴鲁病毒、盖他病毒、鹭山病毒、马雅罗病毒及其亚型乌纳病毒；委内瑞拉马脑炎复合体包括委内瑞拉马脑炎病毒、卡巴斯欧病毒、沼泽地病毒、穆坎布病毒、图那特病毒、皮克苏纳病毒、莫索·达斯·佩德拉斯病毒、内格罗河病毒；西部马脑炎复合体包括西部马脑炎病毒、辛德毕斯病毒、奥拉病毒、瓦塔罗阿病毒、高地J病毒、摩根堡病毒及其亚型博吉河病毒；东部马脑炎病毒、米德尔堡病毒、图那特病毒、孜拉加奇病毒、恩杜姆病毒、巴班肯病毒、挪威鲑鱼甲病毒、鲑鱼胰腺病病毒、睡病病毒和南方象海豹病毒。