[发明专利]一种永生化绵羊皮肤成纤维细胞系及其培养方法与应用

权利要求书

1.一种绵羊皮肤成纤维细胞系，其特征在于，所述细胞系为绵羊胎儿皮肤成纤维细胞自然传代获得，命名为绵羊皮肤成纤维细胞LSF-2，该细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CGMCC NO.23100。

2.权利要求1所述的绵羊皮肤成纤维细胞系在山羊痘病毒属(Capripoxvirus,CaPV)病毒的分离和/或培养中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述山羊痘病毒属(Capripoxvirus,CaPV)病毒包括山羊痘病毒(Goatpox virus,GPV)、绵羊痘病毒(Sheeppox virus,SPV)和牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)。

4.权利要求1所述的绵羊皮肤成纤维细胞系的培养方法，其特征在于，使用完全培养基培养所述绵羊皮肤成纤维细胞系；所述完全培养基是DMEM/F12培养基中添加了新生牛血清(NBS)、氢化可得松和重组人碱性成纤维生长因子得到的培养基。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述完全培养基是DMEM/F12培养基中添加了质量百分浓度为4％的新生牛血清、1ug/ml氢化可得松以及10ng/ml重组人碱性成纤维生长因子的培养基。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在37℃、5％CO₂培养箱内，所述绵羊肾细胞系在细胞培养瓶中贴壁培养。

7.一种山羊痘病毒属病毒的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)培养绵羊皮肤成纤维细胞系LSF-2长成致密单层后1:6的比例进行传代；

2)培养24h后绵羊皮肤成纤维细胞系LSF-2长成单层细胞，弃去生长液，按培养体积的0.1％的接种量接种山羊痘病毒，无须吸附，直接加入细胞维持液置37℃温室中继续培养；所述细胞维持液为含质量百分浓度为2％小牛血清的DMEM/F12培养液，pH7.2；

3)培养96小时，此时细胞病变接近100％，反复冻融两次，获得病毒液；

所述绵羊皮肤成纤维细胞系LSF-2，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO.23100。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤1)和步骤2)中，羊皮肤成纤维细胞系LSF-2的培养按照权利要求4-6中任意一项所述的方法培养。