[发明专利]与松散型花椰菜矮茎基因连锁的分子标记及应用

权利要求书

1.一种与松散型花椰菜矮茎基因连锁的分子标记，其特征在于，为花椰菜9号染色体第1732384位核苷酸处G向A的突变。

2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述分子标记对应的基因型：A：A为具有矮茎表型的基因型，G：A和G：G为不具有矮茎表型的基因型。

3.根据权利要求1或2所述的分子标记，其特征在于，针对突变位点设计的分子标记引物如下：

正向引物SS-1：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGAGAAGATCGCTGCTTCGTTTAG-3’；

正向引物SS-2：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGAGAAGATCGCTGCTTCGTTTAA-3’；

反向引物Primer_Common：5’-CAATGGCTGCAATACCATCAGTAG-3’。

4.根据权利要求3所述的分子标记，其特征在于，两个正向引物分别连接不同的荧光接头序列；正向引物SS-1的5’端连接FAM荧光接头序列，正向引物SS-2的5’端连接HEX荧光接头序列；FAM和HEX荧光接头序列分别为：

FAM：GAAGGTGACCAAGTTCATGCT；

HEX：GAAGGTCGGAGTCAACGGATT。

5.权利要求1-4任一项所述的分子标记在鉴定或辅助鉴定松散型花椰菜高矮茎植株性状中的应用。

6.一种鉴定松散型花椰菜高矮茎植株性状的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)以待测花椰菜样品基因组DNA为模板，利用权利要求3中所述的分子标记引物进行PCR扩增，获得扩增产物；

(2)对扩增产物进行荧光检测与分析，如果样品PCR产物只检测到连接了荧光接头序列的引物SS-2对应的HEX荧光信号，则检测位点为A：A基因型，判定为具有矮茎表型的纯合单株；如果样品PCR产物只检测到连接了荧光接头序列的引物SS-1对应的FAM荧光信号，则检测位点为G：G基因型，判定为高茎表型的纯合单株；若同时检测到连接了荧光接头序列的引物SS-1和SS-2对应的两种HEX和FAM荧光信号，则检测位点为G：A基因型，判定为高茎表型的杂合单株。

7.根据权利要求6所述的鉴定松散型花椰菜高矮茎植株性状的方法，其特征在于，采用Touchdown PCR；Touchdown PCR扩增程序为：94℃15min；95℃20s；65℃-56℃60s，10个循环，每个循环退火延伸温度降0.8℃；94℃20s；57℃60s，26个循环。

8.一种用于鉴定花椰菜矮茎性状的试剂盒，其特征在于，包含权利要求3中所述的引物。

9.用于检测权利要求1中所述分子标记是否存在的试剂在花椰菜矮茎基因CauSS定位中的应用，其特征在于，扩增所述分子标记引物的正向引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示，反向引物序列如SEQ ID NO.3所示。