[发明专利]用于角膜营养不良的基因检测试剂、试剂盒

说明书

本发明提供一种用于角膜营养不良的基因检测试剂盒，包括血液样品前处理试剂和扩增试剂，所述的血液样品前处理试剂中包括：1‑50mM Tris、1‑20mM异硫酸氰胍、20‑80mM月桂醇、300‑500mM赤藓糖醇、中性蛋白酶5000‑8000U/mL，余量为水，pH为6.5‑7.5；所述的扩增试剂中包括扩增引物和探针。本发明提供的试剂盒从全血样本检测角膜营养不良时，其操作简便、耗时短，不需要额外的核酸提取操作，且试剂盒检测准确性高，可用于角膜营养不良病因诊断和基因筛查，临床应用前景较广阔。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及用于角膜营养不良的基因检测试剂、试剂盒。

背景技术

角膜营养不良为一系列与家族遗传有关的原发性进行性角膜病变的总称。该病多数为常染色体显性遗传；原发于角膜，多侵犯角膜中央，双眼对称；病程缓慢，病变区多无新生血管生长；开始只侵犯角膜的某一层；晚期可波及邻近层次，甚至影响全层角膜；药物治疗无效。影响视力者可行角膜移植手术治疗。

对于角膜营养不良的早期基因筛查有利于尽早干预，避免出现后期病情加重的情况。现有技术中已经公开了与角膜营养不良相关的一些基因上的突变位点，如TGFβI基因、CHST6基因、BIGH3基因、TMCO3基因等，多是针对这些基因上的突变位点进行引物和探针设计，通过提取DNA进行PCR扩增，测序后进行角膜营养不良的诊断。

中国专利CN201711147057.4中公开了一种用于诊断人TGFβI基因124位点变异引起角膜营养不良的引物探针，包括针对TGFβI基因124位点设计的特异性引物：针对野生型位点R124的特异性野生型Taqman荧光探针，以及针对突变型位点C124、S124、H124以及L124的四条特异性突变型Taqman荧光探针中的至少一条，每条探针连接不同的荧光报告基团，以便通过采集不同的荧光信号进行分别监测，并且不需要添加内参。还提供了基于上述引物探针的人TGFβI基因124位点变异的检测方法，具有灵敏度高、特异性强、不易污染、准确性好、方便快捷等优点，适合应用到临床病例分析和检验工作中。

中国专利CN201611138588.2中公开了一种检测颗粒状角膜营养不良易感基因突变位点的试剂盒。本发明的试剂盒包括引物对A、引物对B、引物对C以及延伸引物A1、延伸引物A2、延伸引物B和延伸引物C；该试剂盒可以检测rs121909208、rs121909209、rs121909211和rs121909215的核苷酸，也可用于辅助诊断颗粒状角膜营养不良。

但现有技术对于角膜营养不良的基因诊断都需要通过DNA提取后再进行扩增，操作复杂耗时长，开发一种检测效率更高的试剂盒对于临床十分必要。

发明内容

为了解决上述问题，本发明旨在提供一种可以直接将血液样本用于角膜营养不良的基因检测试剂盒，同时扩增多个相关位点，耗时短，操作易，以便更快更准确地进行检测。

一方面，本发明提供了一种用于角膜营养不良的基因检测试剂盒。

具体地，所述的试剂盒中包括血液样品前处理试剂和扩增试剂。

进一步具体地，所述的血液样品前处理试剂中包括：1-50mM Tris，1-20mM异硫酸氰胍，20-80mM月桂醇，300-500mM赤藓糖醇，中性蛋白酶5000-8000U/mL，余量为水，pH为6.5-7.5；所述的扩增试剂中包括扩增引物和探针。

优选地，所述的前处理试剂中包括：20-40mM Tris，10-20mM异硫酸氰胍，20-60mM月桂醇，400-500mM赤藓糖醇，中性蛋白酶5000-6000U/mL。

进一步优选地，所述的前处理试剂中包括：25-40mM Tris，10-15mM异硫酸氰胍，50-60mM月桂醇，400-500mM赤藓糖醇，中性蛋白酶5000-6000U/mL。